【摘 要】
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目的构建线粒体膜蛋白Nix基因过表达与shRNA慢病毒载体。方法 PCR扩增获得Nix基因序列,与经BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切的pHBLV-CMVIE-IRES-Puro载体连接获得Nix过表达重组慢病毒载
【机 构】
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成都医学院生物医学系,成都医学院检验医学院,成都医学院第一附属医院检验科
【基金项目】
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国家自然科学基金青年基金(No:31201045);四川省应用基础研究计划项目(No:2012JY0113);国家级大学生创新创业训练计划项目(No:201513705043);发育与再生四川省重点实验室基金项目(No:SYS12-004)
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目的构建线粒体膜蛋白Nix基因过表达与shRNA慢病毒载体。方法 PCR扩增获得Nix基因序列,与经BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切的pHBLV-CMVIE-IRES-Puro载体连接获得Nix过表达重组慢病毒载体;以Nix为靶基因,合成寡核苷酸,退火形成双链DNA,与经BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切的pHBLV-U6-Scramble-Puro载体连接获得Nix shRNA重组慢病毒载体;将病毒包装辅助质粒与上述重组慢病毒载体共转染293T细胞,收集上清液并浓缩获得慢病毒浓缩液,3倍梯度稀释法测定病毒滴度;用
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