研究腹腔巨噬细胞中的胱天蛋白酶募集域蛋白9(CARD9)表达对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)的影响及其作用机制。
方法将60只雄性Sprague Dawley大鼠分成对照组(6只)、SAP组(18只)、小干扰对照组(18只)和小干扰CARD9组(18只)。建立SAP大鼠模型，造模后3、6、12 h收集腹水并行腹腔灌洗，分离、培养腹腔巨噬细胞。采用实时荧光定量PCR法检测腹腔巨噬细胞中CARD9、NF-κB、p38MAPK的mRNA水平。采用ELISA法检测大鼠外周血中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平。统计学分析采用LSD检验或Tamhane′s T2法。
结果造模后3、6、12 h，SAP组大鼠腹腔巨噬细胞中的CARD9 mRNA水平分别为1.63±0.05、1.68±0.24、2.61±0.02，均高于对照组的1.01±0.23，差异均有统计学意义(t＝25.97、6.86、131.59，P均<0.05)；小干扰CARD9组的CARD9 mRNA水平分别为1.45±0.02、1.24±0.03、1.63±0.03，分别低于SAP组同一时间点的水平，差异均有统计学意义(t＝－7.81、－4.46、－62.13，P均<0.05)。造模后3、6、12 h，SAP组大鼠腹腔巨噬细胞中NF-κB和p38MAPK的mRNA水平分别为1.51±0.08、1.81±0.10、2.30±0.05和1.37±0.13、1.69±0.18、2.42±0.23，分别高于对照组的1.00±0.01和1.03±0.08，差异均有统计学意义(tNF-κB＝15.10、19.95、60.36，tp38MAPK＝5.37、8.34、14.11；P均<0.05)；小干扰CARD9组NF-κB mRNA水平分别为1.38±0.05、1.57±0.06、1.76±0.09，分别低于SAP组同一时间点的水平，差异均有统计学意义(t＝－3.32、－5.07、－12.70，P均<0.05)；造模后6和12 h，小干扰CARD9组p38MAPK mRNA水平分别为1.50±0.10、2.00±0.09，分别低于SAP组，差异均有统计学意义(t＝－2.30、－4.17，P均<0.05)。造模后3、6、12 h，SAP组外周血中TNF-α、IL-1β和IL-6的水平分别为(53.49±21.64)、(108.62±22.76)、(139.00±15.35) pg/mL，(43.86±18.30)、(87.51±17.10)、(117.27±14.57) pg/mL，(78.38±32.70)、(156.39±30.56)、(209.56±26.09) pg/mL，分别高于对照组的(2.79±1.17)、(7.13±4.52)、(12.73±8.08) pg/mL，差异均有统计学意义(tTNF-α＝5.73、11.37、21.69，tIL-1β＝4.77、11.13、17.68，tIL-6＝4.77、11.32、17.68；P均<0.05)；造模后6和12 h，小干扰CARD9组TNF-α、IL-1β和IL-6水平分别为(75.73±16.93)、(108.23±14.02) pg/mL，(63.05±11.98)、(91.56±14.28) pg/mL，(112.67±21.40)、(163.62±25.51) pg/mL，分别低于SAP组，差异均有统计学意义(tTNF-α＝－2.84、－3.63，tIL-1β＝－2.88、－3.09，tIL-6＝－2.88、－3.09；P均<0.05)。
结论SAP大鼠腹腔巨噬细胞存在CARD9相关的NF-κB、p38MAPK信号通路，干扰腹腔巨噬细胞中CARD9的表达，在SAP早期阶段进行干预，能减轻炎性反应和胰腺损伤，为SAP的治疗提供新思路。