论文部分内容阅读
摘要：将均重为18.0g的600尾异育银鲫鱼种（Allogygenetic crucian carp）随机分成10组，每组设2个重复，分别在其养殖水体中添加不同浓度（5×108、5×109、5×1010cfu/m3）的光合细菌、芽胞杆菌或1：1的光合细菌芽胞杆菌混合菌，饲养40d后，测定异育银鲫肠道和肝胰脏的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活性。结果表明，综合考虑芽胞杆菌和光合细菌对异育银鲫肠道和肝胰脏蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶三者的影响，在本试验浓度范围内，浓度为5×109cfu/m3的芽孢杆菌效果最好。
关键词：异育银鲫；芽孢杆菌；光合细菌；消化酶
随着水产养殖业的迅速发展，集约式工业化养殖规模日益扩大，与此同时，大量的工业废水和农业污水排放，使天然水域受到污染，养殖生态环境日益恶化。各种疾病频繁暴发，成了制约养殖业发展的重要因素，对鱼病的防治和控制显得越来越重要。目前人们多采用广谱抗生素控制病害的发生，这些过度使用的抗生素药物不仅使病菌的耐药性增强，而且还干扰了养殖环境中有益生物群的生长繁殖，引起微生态平衡失调，产生二次污染和内源性感染。鉴于此，近年来人们开始尝试在养殖水体中使用微生态制剂来改善养殖生态环境。采用微生态制剂增强水产养殖对象的免疫力与抵抗力,改善水质，减少渔业病害的发生,正逐渐成为控制渔业疾病、保证养殖效益的关键措施，因而在水产养殖水体或饵料中添加微生态制剂成为国内外学者研究的热点，但是微生态制剂的作用机理还有待进一步研究。对于微生态制剂对鱼体消化酶的影响，有关学者已做了一些研究，但是报道不多，而且主要集中在饲料中添加微生态制剂对鱼体消化酶的影响，有关水体中添加微生态制剂对鱼体消化酶的影响未见报道。芽胞杆菌和光合细菌作为水质改良剂作用较明显，本文通过在异育银鲫养殖水体中添加不同浓度的光合细菌和芽胞杆菌，测定试验鱼消化系统蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活性，研究作为水质改良剂的光合细菌和芽胞杆菌对鱼体的消化能力的影响，为水质改良剂的应用提供更全面的理论依据。
1材料
1.1实验鱼
异育银鲫，体长7～10cm，体重18～22g，07年3月购于盐都楼王养殖场。
1.2微生态制剂
光合细菌（Photosynthetic bactria简称PSB），荚膜红假单胞菌（Rthodopseudcmonas capsulate），液体状，活菌量为5×108CFU/mL；地衣芽抱杆菌（Bacillus lichenifirmis)，粉末状，活菌量为2×109CFU/g。2种有益菌均由中国水产科学研究院南海水产研究所自行分离、筛选的菌株培养研制而成。
2方法
2.1试验方案
参照微生态制剂产品说明书和文献设定试验芽胞杆菌和光合细菌的浓度。分别设定芽胞杆菌、光合细菌和芽胞杆菌与光合细菌1：1的混合制剂三大组，每种微生态制剂均设定三个浓度，分别为5×108、5×109和5×1010 cfu/m3，设一对照组，总共分为10组，每组设一平行，具体见表1。
2.2饲养管理
将从养殖场购买的异育银鲫用食盐水消毒后，在室内暂养18d，随机分为20组。水族箱规格为70×40×45cm，注水量为80L。按照表1添加微生态制剂。实验期间每天投喂大丰明天开发有限公司的异育银鲫鱼种饵料2～3次。根据水温和鱼体摄食情况调整投喂次数和投饵量，每天投饲量为鱼体重的2%～4%，投饵后1h吸取残饵和粪便。每周换水一次，换水的同时添加微生态制剂。实验期间充氧。饲养49d后，每组随机取6条实验鱼，解剖取出肠道和肝胰脏，测定其蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活性。
2.3蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的测定
蛋白酶的测定采用福林-酚试剂法，蛋白酶单位（U）定义为1g食糜组织在30℃、PH为7.0的条件下，每分钟水解酪蛋白产生1μg酪氨酸的酶量为1个蛋白酶活力单位。
淀粉酶的测定采用碘-淀粉比色法，淀粉酶活性单位（U）定义为1g食糜组织在30℃，PH为7.0的条件下，每分钟水解1mg的淀粉为1个淀粉酶活力单位。
脂肪酶的测定采用聚乙烯醇橄榄油乳化液水解法，脂肪酶活性单位（U）定义为在30℃，PH为7.0的条件下，每分钟水解脂肪产生1μg脂肪酸的酶量定为一个脂肪酶活力单位。
2.4数据处理
试验数据用SAS单因子方差分析（One-way ANOVY）进行HSD法多重比较，p>0.05表示差异不显著，p<0.05表示差异显著。
2结果
2.1光合细菌和芽胞杆菌对异育银鲫肠和肝胰脏蛋白酶的影响
注：表中所标字母相同者表示差异不显著（p>0.05），不相同者差异显著（p<0.05）
试验结果显示（表1），添加5×109 cfu/m3的芽孢杆菌可以显著（p<0.05）提高异育银鲫肠蛋白酶的活性。光合细菌和两种菌的混合制剂不能提高异育银鲫肠蛋白酶的活性。在本实验中芽孢杆菌对异育银鲫蛋白酶活性影响的最佳投放量为5×108cfu/m3。
2.2光合细菌和芽胞杆菌对异育银鲫肠和肝胰脏淀粉酶的影响
表3 光合细菌和芽孢杆菌对异育银鲫肠和肝胰脏淀粉酶活性的影响
试验结果表明（表2），试验组鱼体肠淀粉酶活性均高于空白组。其中，Y2、G2、YG2组效果显著（P<0.05）。Y2组肠和肝胰脏的淀粉酶活性均最高。
2.3光合细菌和芽胞杆菌对异育银鲫肠和肝胰脏脂肪酶的影响
试验结果显示（表3），水体中投放芽胞杆菌或光合细菌对异育银鲫鱼体肠道和肝胰脏脂肪酶作用不显著（p﹥0.05），但是芽孢杆菌和混合细菌对异育银鲫鱼体肠道和肝胰脏脂肪酶活性具有一定的促进作用。
3讨论
综合本试验结果，发现从使异育银鲫鱼种消化酶活性提高的角度考虑，芽胞杆菌效果优于光合细菌，而且其最适添加量为5×109 cfu/m3。芽胞杆菌使鱼体肠道消化酶活性提高的报道较多。潘康成等给鲤鱼投喂芽孢杆菌，鲤鱼肠道蛋白酶和淀粉酶活性比对照组分别提高了20.54%和61.95%（P<0.05），黄永春等在建鲤饲料中添加6%有效微生态制剂（EM），建鲤肠道和肝胰脏蛋白酶活性比对照组分别提高了17.70%和5.78%。这些研究结果均有力的说明，芽孢杆菌等微生态制剂的适量添加能提高养殖动物肠道、肝胰脏消化酶活性，这是微生态制剂促进养殖动物生长的重要因素之一。Sogarrd等报道，枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌具有较强的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性；酵母菌和霉菌均能产生多种酶类如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶等，可提高蛋白质和能量利用率。国内许多研究者也认为微生态制剂具有消化酶活性。然而本实验结果表明芽胞杆菌的作用效果并不是随着其添加量的增加而增加的，芽胞杆菌的具体作用机理和最佳使用方法还有待进一步研究。
参考文献
1. 陈兵,何世山,朱凤香,等.纳豆芽孢杆菌剂对AA鸡生产性能和十二指肠消化酶的影响[J].浙江农业学报,2003,15(5):289-292.
2. 张晓梅,蔡荣,陈可毅,等.饲喂不同类型微生态制剂对雏鸡消化酶活性的影响[J].饲料研究,1999(7):4-6．
3. 王梦亮,郭小青,粱生康,等.光合细菌(PSB)对鲤鱼肠道菌群及肠消化功能的影响[J].中国微生态学杂志,1999,11(3):146-147．
4. 叶元土,张勇,张宇,等.酶制剂EA-II和生物制剂BA-I对鲤肠道、肝胰脏的蛋白酶和淀粉酶活性的影响[J].大连水产学院学报,1993,8(1):79-82.
5. 潘康成,何明清,刘克琳.微生物添加剂对鲤鱼生长和消化酶活性的影响研究[J].饲料工业,1997,18(9):41-42．
6. 王子彦. 饲料中添加微生物制剂对鲤鱼消化酶活性影响的研究[J]．四川农业大学学报,1994,12(增刊):662-663．
7. Sogarrd DH, Denmark TS．Microbialsfor feed beyond lacticacid bacteria[J]．Feed Inter,1990,11(4):32-37．
8. 于东祥,柳学周,雷麒麟.甲壳胺制剂对真鲷幼鱼的促生长作用研究[J].海洋水产研究,2000,21(3):62-66．
9. 韩庆,夏维福,罗玉双,等.酶制剂对斑节对虾生长性能的影响[J].水产学杂志, 2002,15(1):84-86.
10. 司亚东,金有坤,周洪琪,等.鲤鱼白肌RNA/DNA值与其生长的关系[J].上海水产大学学报,1992,12:159-167．
11. 瞿建宏,黄厚榕,吴伟．光合细菌(PSB)在西伯利亚鲟鱼饲料中的作用及其对主要消化酶活性的影响[J].粮食与饲料工业,2003,(11):27-29.
12. 丁雷,岳永生,李贵杰,等.芽孢菌对养鱼水质影响的研究[J].淡水渔业,1999,29(10): 7-10．
13. 刘小刚,周洪淇,华雪铭,等.微生态制剂对异育银鲫消化酶活性的影响[J].水产学报,2002,26(5):448-452．
关键词：异育银鲫；芽孢杆菌；光合细菌；消化酶
随着水产养殖业的迅速发展，集约式工业化养殖规模日益扩大，与此同时，大量的工业废水和农业污水排放，使天然水域受到污染，养殖生态环境日益恶化。各种疾病频繁暴发，成了制约养殖业发展的重要因素，对鱼病的防治和控制显得越来越重要。目前人们多采用广谱抗生素控制病害的发生，这些过度使用的抗生素药物不仅使病菌的耐药性增强，而且还干扰了养殖环境中有益生物群的生长繁殖，引起微生态平衡失调，产生二次污染和内源性感染。鉴于此，近年来人们开始尝试在养殖水体中使用微生态制剂来改善养殖生态环境。采用微生态制剂增强水产养殖对象的免疫力与抵抗力,改善水质，减少渔业病害的发生,正逐渐成为控制渔业疾病、保证养殖效益的关键措施，因而在水产养殖水体或饵料中添加微生态制剂成为国内外学者研究的热点，但是微生态制剂的作用机理还有待进一步研究。对于微生态制剂对鱼体消化酶的影响，有关学者已做了一些研究，但是报道不多，而且主要集中在饲料中添加微生态制剂对鱼体消化酶的影响，有关水体中添加微生态制剂对鱼体消化酶的影响未见报道。芽胞杆菌和光合细菌作为水质改良剂作用较明显，本文通过在异育银鲫养殖水体中添加不同浓度的光合细菌和芽胞杆菌，测定试验鱼消化系统蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活性，研究作为水质改良剂的光合细菌和芽胞杆菌对鱼体的消化能力的影响，为水质改良剂的应用提供更全面的理论依据。
1材料
1.1实验鱼
异育银鲫，体长7～10cm，体重18～22g，07年3月购于盐都楼王养殖场。
1.2微生态制剂
光合细菌（Photosynthetic bactria简称PSB），荚膜红假单胞菌（Rthodopseudcmonas capsulate），液体状，活菌量为5×108CFU/mL；地衣芽抱杆菌（Bacillus lichenifirmis)，粉末状，活菌量为2×109CFU/g。2种有益菌均由中国水产科学研究院南海水产研究所自行分离、筛选的菌株培养研制而成。
2方法
2.1试验方案
参照微生态制剂产品说明书和文献设定试验芽胞杆菌和光合细菌的浓度。分别设定芽胞杆菌、光合细菌和芽胞杆菌与光合细菌1：1的混合制剂三大组，每种微生态制剂均设定三个浓度，分别为5×108、5×109和5×1010 cfu/m3，设一对照组，总共分为10组，每组设一平行，具体见表1。
2.2饲养管理
将从养殖场购买的异育银鲫用食盐水消毒后，在室内暂养18d，随机分为20组。水族箱规格为70×40×45cm，注水量为80L。按照表1添加微生态制剂。实验期间每天投喂大丰明天开发有限公司的异育银鲫鱼种饵料2～3次。根据水温和鱼体摄食情况调整投喂次数和投饵量，每天投饲量为鱼体重的2%～4%，投饵后1h吸取残饵和粪便。每周换水一次，换水的同时添加微生态制剂。实验期间充氧。饲养49d后，每组随机取6条实验鱼，解剖取出肠道和肝胰脏，测定其蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活性。
2.3蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的测定
蛋白酶的测定采用福林-酚试剂法，蛋白酶单位（U）定义为1g食糜组织在30℃、PH为7.0的条件下，每分钟水解酪蛋白产生1μg酪氨酸的酶量为1个蛋白酶活力单位。
淀粉酶的测定采用碘-淀粉比色法，淀粉酶活性单位（U）定义为1g食糜组织在30℃，PH为7.0的条件下，每分钟水解1mg的淀粉为1个淀粉酶活力单位。
脂肪酶的测定采用聚乙烯醇橄榄油乳化液水解法，脂肪酶活性单位（U）定义为在30℃，PH为7.0的条件下，每分钟水解脂肪产生1μg脂肪酸的酶量定为一个脂肪酶活力单位。
2.4数据处理
试验数据用SAS单因子方差分析（One-way ANOVY）进行HSD法多重比较，p>0.05表示差异不显著，p<0.05表示差异显著。
2结果
2.1光合细菌和芽胞杆菌对异育银鲫肠和肝胰脏蛋白酶的影响
注：表中所标字母相同者表示差异不显著（p>0.05），不相同者差异显著（p<0.05）
试验结果显示（表1），添加5×109 cfu/m3的芽孢杆菌可以显著（p<0.05）提高异育银鲫肠蛋白酶的活性。光合细菌和两种菌的混合制剂不能提高异育银鲫肠蛋白酶的活性。在本实验中芽孢杆菌对异育银鲫蛋白酶活性影响的最佳投放量为5×108cfu/m3。
2.2光合细菌和芽胞杆菌对异育银鲫肠和肝胰脏淀粉酶的影响
表3 光合细菌和芽孢杆菌对异育银鲫肠和肝胰脏淀粉酶活性的影响
试验结果表明（表2），试验组鱼体肠淀粉酶活性均高于空白组。其中，Y2、G2、YG2组效果显著（P<0.05）。Y2组肠和肝胰脏的淀粉酶活性均最高。
2.3光合细菌和芽胞杆菌对异育银鲫肠和肝胰脏脂肪酶的影响
试验结果显示（表3），水体中投放芽胞杆菌或光合细菌对异育银鲫鱼体肠道和肝胰脏脂肪酶作用不显著（p﹥0.05），但是芽孢杆菌和混合细菌对异育银鲫鱼体肠道和肝胰脏脂肪酶活性具有一定的促进作用。
3讨论
综合本试验结果，发现从使异育银鲫鱼种消化酶活性提高的角度考虑，芽胞杆菌效果优于光合细菌，而且其最适添加量为5×109 cfu/m3。芽胞杆菌使鱼体肠道消化酶活性提高的报道较多。潘康成等给鲤鱼投喂芽孢杆菌，鲤鱼肠道蛋白酶和淀粉酶活性比对照组分别提高了20.54%和61.95%（P<0.05），黄永春等在建鲤饲料中添加6%有效微生态制剂（EM），建鲤肠道和肝胰脏蛋白酶活性比对照组分别提高了17.70%和5.78%。这些研究结果均有力的说明，芽孢杆菌等微生态制剂的适量添加能提高养殖动物肠道、肝胰脏消化酶活性，这是微生态制剂促进养殖动物生长的重要因素之一。Sogarrd等报道，枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌具有较强的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性；酵母菌和霉菌均能产生多种酶类如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶等，可提高蛋白质和能量利用率。国内许多研究者也认为微生态制剂具有消化酶活性。然而本实验结果表明芽胞杆菌的作用效果并不是随着其添加量的增加而增加的，芽胞杆菌的具体作用机理和最佳使用方法还有待进一步研究。
参考文献
1. 陈兵,何世山,朱凤香,等.纳豆芽孢杆菌剂对AA鸡生产性能和十二指肠消化酶的影响[J].浙江农业学报,2003,15(5):289-292.
2. 张晓梅,蔡荣,陈可毅,等.饲喂不同类型微生态制剂对雏鸡消化酶活性的影响[J].饲料研究,1999(7):4-6．
3. 王梦亮,郭小青,粱生康,等.光合细菌(PSB)对鲤鱼肠道菌群及肠消化功能的影响[J].中国微生态学杂志,1999,11(3):146-147．
4. 叶元土,张勇,张宇,等.酶制剂EA-II和生物制剂BA-I对鲤肠道、肝胰脏的蛋白酶和淀粉酶活性的影响[J].大连水产学院学报,1993,8(1):79-82.
5. 潘康成,何明清,刘克琳.微生物添加剂对鲤鱼生长和消化酶活性的影响研究[J].饲料工业,1997,18(9):41-42．
6. 王子彦. 饲料中添加微生物制剂对鲤鱼消化酶活性影响的研究[J]．四川农业大学学报,1994,12(增刊):662-663．
7. Sogarrd DH, Denmark TS．Microbialsfor feed beyond lacticacid bacteria[J]．Feed Inter,1990,11(4):32-37．
8. 于东祥,柳学周,雷麒麟.甲壳胺制剂对真鲷幼鱼的促生长作用研究[J].海洋水产研究,2000,21(3):62-66．
9. 韩庆,夏维福,罗玉双,等.酶制剂对斑节对虾生长性能的影响[J].水产学杂志, 2002,15(1):84-86.
10. 司亚东,金有坤,周洪琪,等.鲤鱼白肌RNA/DNA值与其生长的关系[J].上海水产大学学报,1992,12:159-167．
11. 瞿建宏,黄厚榕,吴伟．光合细菌(PSB)在西伯利亚鲟鱼饲料中的作用及其对主要消化酶活性的影响[J].粮食与饲料工业,2003,(11):27-29.
12. 丁雷,岳永生,李贵杰,等.芽孢菌对养鱼水质影响的研究[J].淡水渔业,1999,29(10): 7-10．
13. 刘小刚,周洪淇,华雪铭,等.微生态制剂对异育银鲫消化酶活性的影响[J].水产学报,2002,26(5):448-452．