目的 探索建立低声强脉冲超声联合SonoVue微泡培养孔内直接辐照增强5-氮杂胞苷(5-Aza)体外诱导入骨髓间质干细胞(MSCs)心肌样分化的方法,摸索超声辐照条件,为超声靶向击破微泡技术在MSCs移植治疗急性心肌梗死中的应用提供实验数据.方法 ①以不同的超声辐照强度(0.11、0.33、0.55、0.77、0.99 W/cm2)与不同的辐照时间(0、30、60、90 s)组合于六孔板培养孔内直接超声辐照MSCs,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法筛选出对其活性无明显抑制的声强-时间组;将筛选出的超声辐照强度-时间联合不同微泡数/干细胞数比例(0、10、50、100、150)对应的造影剂剂量于培养孔内直接超声辐照MSCs,用MTT筛选出对其无明显抑制的微泡数/干细胞数比例;②将MSCs随机分为4组,各自采用如下体外心肌化诱导方式:对照组、5-Aza(10μmol/L)组、超声辐照微泡组、5-Aza(10 μmol/L)+超声辐照微泡组,诱导后培养4周,倒置相差显微镜逐日观察细胞形态学变化,并于诱导后28 d免疫细胞化学染色法检测心肌特异肌钙蛋白T(cTnT)表达,计算并比较各组的心肌样细胞分化率.结果 ①无明显抑制MSCs且具有一定微泡击破效应的培养孔内直接超声辐照条件为辐照强度0.55 W/cm2,辐照时间为30 s,微泡数/干细胞数比值为50;②各组MSCs诱导后免疫细胞化学染色法检测发现5-Aza组及5-Aza+超声辐照微泡组可见cTnT表达阳性,且后组阳性率显著高于前组(13.69％对34.13％,P＜0.05).结论 声强0.55 W/cm2、辐照时间30 s、微泡数/干细胞数比50是适当的直接孔内超声辐照条件;在适当条件下的低声强脉冲超声辐照能够增强5-Aza体外诱导MSCs心肌样分化效果。