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【摘要】目的:建立苍耳子口服液的薄层鉴别方法。方法:采用不同的展开系统,分别对处方中川芎、白芷、黄芩所含黄芩苷、金银花所含绿原酸进行了薄层鉴别方法的研究。结果:川芎以正己烷—醋酸乙酯(9:1)、白芷以氯仿—甲醇(9:1)、黄芩苷以醋酸丁酯—甲酸—水(7:4:3)上层溶液和绿原酸以醋酸丁酯—甲酸—水(14:5:5)上层溶液为展开剂展开,均能获得较好的分离,且阴性无干扰。结论:建立了苍耳子口服液中川芎、白芷、黄芩所含黄芩苷、金银花所含绿原酸的薄层鉴别方法,且方法稳定,可行,具有实用性。
【关键词】苍耳子口服液;川芎;白芷;黄芩苷;绿原酸;薄层鉴别方法
苍耳子口服液由柴胡、荆芥、川芎、白芷、金银花、败酱、蒲公英、 黄芩、鱼腥草、辛荑等中药组成。我们对处方中的川芎、白芷、黄芩所含黄芩苷、金银花所含绿原酸分别制定了薄层鉴别方法(TLC),为控制该产品的质量提供依据。实验方法如下。
1仪器与试药
手动涂铺器(100mm,上海信谊仪器厂),喷雾器。层析缸(100mm×200mm,上海信谊仪器厂),UV—紫外荧光仪(宜兴市和桥科静仪器厂),薄层色谱用硅胶G(上海化学试剂公司)。
苍耳子口服液(金乡县人民医院中药制剂室提供,批号070082,070094,070110)。黄芩苷、绿原酸对照品、川芎和白芷对照药材均购于中国药品生物制品鉴定所。
2方法与结果
2.1川芎TLC鉴别
2.1.1供试品及对照药材溶液的制备取本品20ml,加乙醚振摇提取3次,每次20ml,合并乙醚液,挥干,残渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液。另取川芎对照药材0.5g,加乙醚15ml,超声处理5分钟,滤过,滤液挥干,残渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作为对照药材溶液。
2.1.2阴性对照液的制备按处方比例称取除川芎外的其他药材,粉碎成粗粉,加水煎煮1h,过滤,取滤液加乙醚振摇提取3次,每次20ml,合并乙醚液,挥干,残渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作为阴性对照溶液。
2.1.3薄层层析分别吸取供试品、对照药材溶液和阴性对照液各10ul,点于同一硅胶G薄层板上,分别以正己烷—醋酸乙酯(9:1①)[1]、氯仿-甲醇(10:1②)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;结果以①展开时,荧光斑点的比移值(Rf)为0.2～0.8,展开较好[2];而以②展开时荧光斑点的比移值(Rf)接近1,荧光斑点位于展开剂前沿,展开剂溶剂强度太强。2种展开剂展开时,阴性对照液色谱中,在与对照药材色谱相应位置处均无斑点。
2.2白芷TLC鉴别
2.2.1供试品及对照药材溶液的制备取本品30ml,用20%氢氧化钠溶液调节pH值至12,用氯仿振摇提取2次,每次20ml,合并氯仿液,蒸干,残渣加氯仿1ml使溶解,作为供试品溶液。另取白芷对照药材1g,加水煎煮30分钟,放冷,滤过,滤液同法制成对照药材溶液。
2.2.2阴性对照液的制备按处方比例称取除白芷外的其他药材,粉碎成粗粉,加水煎煮1h,过滤,取滤液用20%氢氧化钠溶液调节pH值至12,用氯仿振摇提取2次,每次20ml,合并氯仿液,蒸干,残渣加氯仿1ml使溶解,作为阴性对照溶液。
2.2.3薄层层析分别吸取供试品、对照药材溶液和阴性对照液各10ul,点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-甲醇(10:1)为展开剂,用浓氨试液饱和,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。
2.3黄芩苷TLC鉴别
2.3.1供试品及对照品溶液的制备取本品20ml,用稀盐酸调节pH值至2,用醋酸乙酯振摇提取2次,每次20ml,合并醋酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品,加甲醇制成每1ml含2mg的溶液。
2.3.2阴性对照液的制备按处方比例称取除黄芩外的其他药材,粉碎成粗粉,加水煎煮1h,过滤,取滤液用稀盐酸调节pH值至2,用醋酸乙酯振摇提取2次,每次20ml,合并醋酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为阴性对照溶液。
2.3.3薄层层析分别吸取供试品、对照品溶液和阴性对照液各2ul,点于同一硅胶G薄层板上,以醋酸丁酯—甲酸—水(7:4:3)上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2%三氯化铁乙醇溶液。
2.4绿原酸TLC鉴别
2.4.1供试品及对照品溶液的制备取本品20ml,加硅藻土拌匀,蒸干,残渣加乙醇15ml超声处理10分钟,滤过,滤液浓缩至2ml,作为供试品溶液。另取绿原酸对照品,加乙醇制成每1ml含1mg的溶液。
2.4.2阴性对照液的制备按处方比例称取除金银花外的其他药材,粉碎成粗粉,加水煎煮1h,过滤,取滤液加硅藻土拌匀,蒸干,残渣加乙醇15ml超声处理10分钟,滤过,滤液浓缩至2ml,作为阴性对照溶液。
2.4.3薄层层析分别吸取供试品、对照品溶液和阴性对照液各2ul,点于同一硅胶G薄层板上,以醋酸丁酯—甲酸—水(14:5:5)上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,斑点的比移值(Rf)为0.2～0.8,展开较好,阴性对照液色谱中,在与对照品色谱相应位置处无斑点。
3讨论
川芎其化学成分含挥发油约1%,内酯类,生物碱类和酚类化合物。内酯成分主要为4-羟基-3-丁基酞内酯,生物碱类主要有川芎嗪,酚类化合物主要有川芎酚。其中川芎嗪、川芎酚均为极性较强化合物,在川芎硅胶GTLC鉴别中,展开剂系统②的极性较展开剂系统①的强,有较强的洗脱能力,斑点位置接近展开剂的前沿。而展开剂系统①的极性对上述成分的洗脱较为适宜,斑点的比移值(Rf)为0.2～0.8,展开较好。白芷含约10种香豆精类化合物。在白芷硅胶GTLC鉴别中,展开剂系统氯仿-甲醇(10:1)对上述成分的洗脱较为适宜,斑点的比移值(Rf)为0.2～0.8,分离效果好,重现性好,可作为白芷药材的理化鉴别。苍耳子口服液是我院研制的纯中药制剂,为提高药品质量,确保用药安全有效,我们选择方中主要药物川芎、白芷、黄芩和金银花进行了薄层鉴别方法的研究。可作为控制苍耳子口服液质量的依据。
【关键词】苍耳子口服液;川芎;白芷;黄芩苷;绿原酸;薄层鉴别方法
苍耳子口服液由柴胡、荆芥、川芎、白芷、金银花、败酱、蒲公英、 黄芩、鱼腥草、辛荑等中药组成。我们对处方中的川芎、白芷、黄芩所含黄芩苷、金银花所含绿原酸分别制定了薄层鉴别方法(TLC),为控制该产品的质量提供依据。实验方法如下。
1仪器与试药
手动涂铺器(100mm,上海信谊仪器厂),喷雾器。层析缸(100mm×200mm,上海信谊仪器厂),UV—紫外荧光仪(宜兴市和桥科静仪器厂),薄层色谱用硅胶G(上海化学试剂公司)。
苍耳子口服液(金乡县人民医院中药制剂室提供,批号070082,070094,070110)。黄芩苷、绿原酸对照品、川芎和白芷对照药材均购于中国药品生物制品鉴定所。
2方法与结果
2.1川芎TLC鉴别
2.1.1供试品及对照药材溶液的制备取本品20ml,加乙醚振摇提取3次,每次20ml,合并乙醚液,挥干,残渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液。另取川芎对照药材0.5g,加乙醚15ml,超声处理5分钟,滤过,滤液挥干,残渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作为对照药材溶液。
2.1.2阴性对照液的制备按处方比例称取除川芎外的其他药材,粉碎成粗粉,加水煎煮1h,过滤,取滤液加乙醚振摇提取3次,每次20ml,合并乙醚液,挥干,残渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作为阴性对照溶液。
2.1.3薄层层析分别吸取供试品、对照药材溶液和阴性对照液各10ul,点于同一硅胶G薄层板上,分别以正己烷—醋酸乙酯(9:1①)[1]、氯仿-甲醇(10:1②)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;结果以①展开时,荧光斑点的比移值(Rf)为0.2～0.8,展开较好[2];而以②展开时荧光斑点的比移值(Rf)接近1,荧光斑点位于展开剂前沿,展开剂溶剂强度太强。2种展开剂展开时,阴性对照液色谱中,在与对照药材色谱相应位置处均无斑点。
2.2白芷TLC鉴别
2.2.1供试品及对照药材溶液的制备取本品30ml,用20%氢氧化钠溶液调节pH值至12,用氯仿振摇提取2次,每次20ml,合并氯仿液,蒸干,残渣加氯仿1ml使溶解,作为供试品溶液。另取白芷对照药材1g,加水煎煮30分钟,放冷,滤过,滤液同法制成对照药材溶液。
2.2.2阴性对照液的制备按处方比例称取除白芷外的其他药材,粉碎成粗粉,加水煎煮1h,过滤,取滤液用20%氢氧化钠溶液调节pH值至12,用氯仿振摇提取2次,每次20ml,合并氯仿液,蒸干,残渣加氯仿1ml使溶解,作为阴性对照溶液。
2.2.3薄层层析分别吸取供试品、对照药材溶液和阴性对照液各10ul,点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-甲醇(10:1)为展开剂,用浓氨试液饱和,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。
2.3黄芩苷TLC鉴别
2.3.1供试品及对照品溶液的制备取本品20ml,用稀盐酸调节pH值至2,用醋酸乙酯振摇提取2次,每次20ml,合并醋酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品,加甲醇制成每1ml含2mg的溶液。
2.3.2阴性对照液的制备按处方比例称取除黄芩外的其他药材,粉碎成粗粉,加水煎煮1h,过滤,取滤液用稀盐酸调节pH值至2,用醋酸乙酯振摇提取2次,每次20ml,合并醋酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为阴性对照溶液。
2.3.3薄层层析分别吸取供试品、对照品溶液和阴性对照液各2ul,点于同一硅胶G薄层板上,以醋酸丁酯—甲酸—水(7:4:3)上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2%三氯化铁乙醇溶液。
2.4绿原酸TLC鉴别
2.4.1供试品及对照品溶液的制备取本品20ml,加硅藻土拌匀,蒸干,残渣加乙醇15ml超声处理10分钟,滤过,滤液浓缩至2ml,作为供试品溶液。另取绿原酸对照品,加乙醇制成每1ml含1mg的溶液。
2.4.2阴性对照液的制备按处方比例称取除金银花外的其他药材,粉碎成粗粉,加水煎煮1h,过滤,取滤液加硅藻土拌匀,蒸干,残渣加乙醇15ml超声处理10分钟,滤过,滤液浓缩至2ml,作为阴性对照溶液。
2.4.3薄层层析分别吸取供试品、对照品溶液和阴性对照液各2ul,点于同一硅胶G薄层板上,以醋酸丁酯—甲酸—水(14:5:5)上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,斑点的比移值(Rf)为0.2～0.8,展开较好,阴性对照液色谱中,在与对照品色谱相应位置处无斑点。
3讨论
川芎其化学成分含挥发油约1%,内酯类,生物碱类和酚类化合物。内酯成分主要为4-羟基-3-丁基酞内酯,生物碱类主要有川芎嗪,酚类化合物主要有川芎酚。其中川芎嗪、川芎酚均为极性较强化合物,在川芎硅胶GTLC鉴别中,展开剂系统②的极性较展开剂系统①的强,有较强的洗脱能力,斑点位置接近展开剂的前沿。而展开剂系统①的极性对上述成分的洗脱较为适宜,斑点的比移值(Rf)为0.2～0.8,展开较好。白芷含约10种香豆精类化合物。在白芷硅胶GTLC鉴别中,展开剂系统氯仿-甲醇(10:1)对上述成分的洗脱较为适宜,斑点的比移值(Rf)为0.2～0.8,分离效果好,重现性好,可作为白芷药材的理化鉴别。苍耳子口服液是我院研制的纯中药制剂,为提高药品质量,确保用药安全有效,我们选择方中主要药物川芎、白芷、黄芩和金银花进行了薄层鉴别方法的研究。可作为控制苍耳子口服液质量的依据。