【摘 要】
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为了制备伪狂犬病毒(PRV)被膜蛋白VP22的单克隆抗体,建立胶体金免疫电镜标记方法,试验首先构建真核重组质粒p CAGGS-UL49,酶切及间接免疫荧光验证该质粒构建是否成功,然后用
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室;
【基金项目】
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国家重点研发计划项目(2016YFD0500705)
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为了制备伪狂犬病毒(PRV)被膜蛋白VP22的单克隆抗体,建立胶体金免疫电镜标记方法,试验首先构建真核重组质粒p CAGGS-UL49,酶切及间接免疫荧光验证该质粒构建是否成功,然后用真核重组质粒以100μg/只的剂量免疫6周龄Balb/c雌性小鼠,经过4次免疫后进行细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性克隆,抗体亚类试剂盒鉴别抗体亚类,收集第5,10,20代次的杂交瘤细胞上清液用ELISA法其效价,Western-blot法鉴定其特异性,对该抗体分别进行50,100,200倍稀释并作为一抗,进行PRV感染细胞内VP22免疫电镜检测。结果表明:获得了1株稳定分泌VP22蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞(3D6),该单克隆的抗体亚类为Ig M,并能与VP22蛋白发生特异性反应,100倍稀释的单克隆抗体可达到利用免疫电镜技术检测细胞内该蛋白表达的最佳效果。说明筛选得到的PRV被膜蛋白VP22单克隆抗体和建立的免疫电镜方法可用于该病毒的致病性及装配机制研究。
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