【摘 要】
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目的培育转入CD59 cDNA首建小鼠,以进一步研究异种移植,并为建立鼠系奠定基础.方法构建转基因结构pEGFP-C1-OMT-CD59,限制性内切酶切除质粒载体,回收、纯化包括人CD59 cDNA、
【机 构】
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徐州市第一人民医院普外科,江苏,徐州,221002;北京大学第三医院普外科,北京,100085;中国农业大学生物技术国家重点实验室,北京,100000
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目的培育转入CD59 cDNA首建小鼠,以进一步研究异种移植,并为建立鼠系奠定基础.方法构建转基因结构pEGFP-C1-OMT-CD59,限制性内切酶切除质粒载体,回收、纯化包括人CD59 cDNA、绿色荧光蛋白(greenfluorescent protein,GFP)基因及各自启动子的约3.3kb的基因片段,用显微注射法将此片段注入小鼠受精卵;提取F0代小鼠尾组织DNA,用PCR法初选,再用Southern杂交法对PCR阳性鼠进一步筛选,确定阳性转基因首建小鼠.结果共注射590枚受精卵,移植于24只受体母鼠中,出生F0代小鼠73只;PCR初选有8只呈阳性(6 :2 ),Southern杂交有2只呈阳性(1 :1 );经粗略估算,整合外源基因拷贝数分别为3和10.结论成功地培育出转入CD59 cDNA首建小鼠,用PCR和Southern杂交法证实了外源片段的整合.
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