【摘 要】
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目的研究miR-140在正常小鼠内耳毛细胞的表达分布及其对编码突触蛋白Dynamin-1的Dnm1基因的靶向调控作用。方法取正常成年C57BL/6小鼠耳蜗基底膜,免疫荧光染色和原位杂交法观
【机 构】
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陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院耳鼻咽喉-头颈外科;
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目(81470694,81271080);西南医院院管课题(JCZD-39)~~
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目的研究miR-140在正常小鼠内耳毛细胞的表达分布及其对编码突触蛋白Dynamin-1的Dnm1基因的靶向调控作用。方法取正常成年C57BL/6小鼠耳蜗基底膜,免疫荧光染色和原位杂交法观察Dynamin-1与miR-140的表达定位情况。构建荧光素酶报告基因载体转染293T细胞,通过荧光素酶活性变化明确Dnm1是否是miR-140的靶基因。携带miR-140前体及空载的腺相关病毒(adenoassociated virus,AAV)通过圆窗膜注射传递到耳蜗中,14 d后RT-PCR检测miR-140及Dnm1的mRNA表达水平,Western blot检测Dynamin-1蛋白的表达水平。结果 miR-140表达于内外毛细胞细胞质,Dynamin-1主要表达于内毛细胞细胞质;荧光素酶活性检测结果显示,miR-140抑制Dnm1的3’UTR荧光素酶报告基因活性(P<0.05)。RT-PCR及Western blot检测结果显示:转染AAV-miR-140后miR-140的相对表达量明显升高,Dnm1的mRNA及其蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论Dnm1是miR-140的靶基因,且miR-140可以抑制内耳毛细胞中Dynamin-1的表达,表明miR-140可能通过抑制Dynamin-1蛋白负向调控内毛细胞突触囊泡内吞过程,进而影响听觉信号的传递。
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