【摘 要】
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目的 对旋毛虫(Trichinella spiralis)与人骨肉瘤细胞MG-63相关抗原基因TCTP进行原核表达,对表达产物进行鉴定及反应原性分析.方法 利用抗MG-63细胞全蛋白抗血清筛选旋毛虫肌
【机 构】
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吉林大学动物医学学院人兽共患病研究教育部重点实验室,吉林长春130062
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目的 对旋毛虫(Trichinella spiralis)与人骨肉瘤细胞MG-63相关抗原基因TCTP进行原核表达,对表达产物进行鉴定及反应原性分析.方法 利用抗MG-63细胞全蛋白抗血清筛选旋毛虫肌幼虫cDNA表达文库得到旋毛虫TCTP基因.PCR扩增TCTP基因,连接至pET-32a(+)载体,构建重组质粒pET-32a(+)-TCTP,转化入感受态细胞BL21(DE3)后用IPTG诱导表达,利用His标签镍离子蛋白纯化柱对表达产物进行纯化,采用SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白的表达及反应原性.结果 经酶切鉴定和测序鉴定,重组质粒pET-32a(+)-TCTP构建正确.SDS-PAGE检测重组蛋白TCTP在原核表达系统中主要以可溶性形式表达,融合蛋白的相对分子质量约为43×103.Wetern blot检测重组蛋白TCTP可被抗MG-63细胞多抗血清识别.结论 成功构建了重组质粒pET-32a(+)-TCTP,表达的重组蛋白TCTP具有反应原性,为该蛋白生物学功能的研究奠定了基础.
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