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利用冷休克表达载体构建含有人胸腺肽α原（proTot）编码基因的质粒并在大肠杆菌单一蛋白生产（sPp）系统中表达单一的可溶性蛋白。以proTamRNA基因序列为模板敲出ACA序列，设计并合成proTα—lessACA目的基因片段后，直接克隆到原核冷休克表达载体pColdII（sp-4）上，将pColdⅡ（sp-4）-proTα—lessACA质粒转化到Escherichia coliB121感受态细胞中，筛选阳性克隆后采用NdeⅠ和HindⅢ限制性内切酶双酶切鉴定。共转pMazF质粒后，采用冷休克方法表达