盐芥TsGPX3基因的克隆、亚细胞定位与原核表达

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以盐芥(Thellungiella salsuginea)为材料,获得TsGPX3的cDNA全长序列,其开放阅读框(ORF)序列长591bp,编码196个氨基酸,具有GPXs家族的3个保守的特征结构域。系统进化分析显示,TsGPX3与同属于十字花科的萝卜RsGPX3、油菜BnGPX3和花椰菜BoGPX3等具有较高的同源性。构建植物表达载体pRTL2-TsGPX3-GFP,利用PEG转化拟南芥原生质体细胞进行瞬时表达,发现TsGPX3蛋白主要定位在细胞膜上。构建原核表达载体pET-TsGPX3,采用不同浓度IPTG对转入E.coliBL21(DE3)的pET-TsGPX3进行诱导表达,获得了分子量约为27kD的蛋白,该蛋白在37℃、诱导培养5h时可获得较高的表达量。
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