【摘 要】
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目的研究氢醌对人淋巴母细胞株TK6细胞蛋白质表达的影响,探讨氢醌引起细胞应答反应的分子机制。方法采用浓度为20. 0μmol/L的氢醌处理TK6细胞24. 0 h,用蛋白裂解液提取细胞
【基金项目】
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国家自然科学基金(81202247);国家职业病临床重点专科建设项目(WY2011873);广东省省级科技计划项目(2014A020212048);深圳市科技计划基础研究项目(JCYJ20140414110951758)
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目的研究氢醌对人淋巴母细胞株TK6细胞蛋白质表达的影响,探讨氢醌引起细胞应答反应的分子机制。方法采用浓度为20. 0μmol/L的氢醌处理TK6细胞24. 0 h,用蛋白裂解液提取细胞总蛋白并进行定量,以双向凝胶电泳分离蛋白质,图像分析后选取电泳差异点进行胶内酶解,采用基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱法进行质谱鉴定。以浓度为0. 0、5. 0、10. 0、20. 0μmol/L的氢醌处理TK6细胞24. 0 h,提取总蛋白后,采用免疫印迹法对质谱鉴定出的热休克蛋白70(HSP70)和泛素结合酶2(UBE2N)的蛋白表达进行检测。结果氢醌处理后引起48个蛋白质差异化表达,质谱鉴定出30个表达上调或下调的差异蛋白,功能包括氧化应激、线粒体能量代谢、细胞骨架、细胞周期以及DNA损伤修复等。5. 0、10. 0、20. 0μmol/L氢醌组TK6细胞的HSP70和UBE2N蛋白相对表达水平均高于0. 0μmol/L氢醌组(P <0. 05),与质谱结果一致。结论氢醌能够通过氧化应激引起TK6细胞毒性,由此引发线粒体能量代谢的改变和DNA损伤修复来进行的应答。
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