【摘 要】
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目的 探索微小RNA-1-3p(miR-1-3p)对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制.方法 实时定量PCR(qPCR)检测正常宫颈细胞(Ect1/E6E7)与宫颈癌细胞(HeLa、Siha及Caski)中miR-1-3p和磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)mRNA水平,选择miR-1-3p表达量最低的细胞株作为后续研究对象;生物学信息预测结合双荧光素酶报告基因法分析miR-1-3p和PGAM1的靶向关系;建立miR-1-3p过表达或抑制PGAM1表达细胞株,观察其对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响;
【机 构】
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南昌大学第一附属医院妇产科,江西南昌330006;南昌大学第三附属医院妇产科,江西南昌330008
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目的 探索微小RNA-1-3p(miR-1-3p)对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制.方法 实时定量PCR(qPCR)检测正常宫颈细胞(Ect1/E6E7)与宫颈癌细胞(HeLa、Siha及Caski)中miR-1-3p和磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)mRNA水平,选择miR-1-3p表达量最低的细胞株作为后续研究对象;生物学信息预测结合双荧光素酶报告基因法分析miR-1-3p和PGAM1的靶向关系;建立miR-1-3p过表达或抑制PGAM1表达细胞株,观察其对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响;蛋白质印迹法(Westem blot)检测细胞周期蛋白D1 (CyclinD1)、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及PGAM1蛋白表达;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡;共转染miR-1-3p和pcDNA-PGAM1,观察PGAM1过表达对miR-1-3p诱导的宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响.结果 与正常宫颈细胞(Ect1/E6E7)比较,宫颈癌细胞(HeLa、Siha及Caski)中miR-1-3p表达下调,PGAM1mRNA和蛋白表达上调,差异有统计学意义(P＜0.05).miR-1-3p在宫颈癌HeLa细胞中表达量最低,PGAM1是miR-1-3p的靶基因,miR-1-3p过表达或抑制PGAM1表达明显抑制HeLa细胞48 h和72 h的细胞活性(P＜0.05),显著增加细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达量,显著降低CyclinD1和Bcl-2蛋白水平(P＜0.05).PGAM1过表达逆转miR-1-3p过表达对HeLa细胞活性、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达的抑制作用,以及逆转对HeLa细胞凋亡、p21和Bax蛋白表达的促进作用.结论 miR-1-3p通过靶向调控PGAM1的表达来抑制宫颈癌细胞增殖,并诱导细胞凋亡.
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