插入单个loxP位点的伪狂犬病病毒上海株TK基因缺失株的构建

来源 :中国生物工程杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:JoanFang
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根据GenBank已发表的pEGFP-C1序列,设计并合成两对引物,PCR扩增出两端各含-loxP位点的GFP表达盒GFP-loxP。克隆于转移载体pSKLR获得pSKLR-GFP-loxP。基于同源重组原理,pSKLR-GFP-10xP与PRVSH株基因组DNA共转染293T细胞,在BrdU的筛选压力下,利用蚀斑法在TK-143细胞上筛选出表达GFP的TK基因缺失的重组毒株rPRV1。将表达Cre酶的质粒载体pPOG231与rPRV1基因组DNA共转染293T细胞,在Cre酶的作用下去除GFP表达盒以及
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