插入单个loxP位点的伪狂犬病病毒上海株TK基因缺失株的构建

来源 :中国生物工程杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：JoanFang

【摘要】

：

根据GenBank已发表的pEGFP-C1序列，设计并合成两对引物，PCR扩增出两端各含-loxP位点的GFP表达盒GFP-loxP。克隆于转移载体pSKLR获得pSKLR-GFP-loxP。基于同源重组原理，pSKLR-GFP

【作者】

：

王敏秀苏鑫铭于春梅曹瑞兵陈溥言

【机构】

：

南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

【出处】

：

中国生物工程杂志

【发表日期】

：

2006年10期

【关键词】

：

伪狂犬病痛毒 TK基因 CRE LOXP GFP重组病毒 PRV TK gene Cre loxP GFP Recombinant virus

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根据GenBank已发表的pEGFP-C1序列，设计并合成两对引物，PCR扩增出两端各含-loxP位点的GFP表达盒GFP-loxP。克隆于转移载体pSKLR获得pSKLR-GFP-loxP。基于同源重组原理，pSKLR-GFP-10xP与PRVSH株基因组DNA共转染293T细胞，在BrdU的筛选压力下，利用蚀斑法在TK-143细胞上筛选出表达GFP的TK基因缺失的重组毒株rPRV1。将表达Cre酶的质粒载体pPOG231与rPRV1基因组DNA共转染293T细胞，在Cre酶的作用下去除GFP表达盒以及

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