【摘 要】
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目的 -D-表型是Rh血型系统中较为特殊的血型表型,该表型仅表达RhD蛋白而不表达RhCE蛋白,其发生频率小于十万分之一.由于目前尚缺乏简单有效的筛选方法,该表型及其基因在中国地区的频率目前还未见报道,本研究拟应用该表型D抗原表达量与正常表型D抗原表达量的差异,开发一种新型筛选试剂对该稀有血型进行初步筛选.方法 利用流式细胞术对-D-表型及表型基因携带者D抗原表达量进行检测;再利用抗原表达差异,通过调整筛选体系内聚凝胺浓度,使得RhD抗原表达量较高的红细胞与筛选试剂发生凝集,达到对-D-表型及其基因携带者
【机 构】
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上海市血液中心,上海200051;太原市血液中心
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目的 -D-表型是Rh血型系统中较为特殊的血型表型,该表型仅表达RhD蛋白而不表达RhCE蛋白,其发生频率小于十万分之一.由于目前尚缺乏简单有效的筛选方法,该表型及其基因在中国地区的频率目前还未见报道,本研究拟应用该表型D抗原表达量与正常表型D抗原表达量的差异,开发一种新型筛选试剂对该稀有血型进行初步筛选.方法 利用流式细胞术对-D-表型及表型基因携带者D抗原表达量进行检测;再利用抗原表达差异,通过调整筛选体系内聚凝胺浓度,使得RhD抗原表达量较高的红细胞与筛选试剂发生凝集,达到对-D-表型及其基因携带者的初步筛选目的 .结果 从流式细胞术免疫荧光值定量结果(MFI)分析,-D-表型细胞RhD抗原表达量(284360±16698,n=3)为正常RhD阳性细胞抗原表达量(98642±35908,n=9)的约3倍(P＜0.01),RHD--杂合子RhD抗原表达量(181109±39455,n=4)为正常RhD阳性细胞抗原表达量的约2倍(P＜0.01);15 μL 3％新鲜红细胞悬液与筛选用体系35 μL(1μL IgG抗-D,29 μL凝聚胺聚凝胺,及5μL低离子强度溶液)的反应体系筛选出的阳性细胞经流式检测RhD抗原表达量(144538±227445,n=7)为正常RhD阳性细胞抗原表达量的约1.5倍.结论 聚凝胺初筛体系可用于-D-表型高通量筛选,为该表型的人群频率等研究提供可靠的的技术手段.
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