制备一种靶向LMP1抗原的嵌合抗原受体T细胞（CAR-T细胞），研究其对EB病毒（EBV）阳性淋巴瘤的免疫治疗作用。
方法应用分子克隆技术构建二代LMP1 CAR表达质粒，通过慢病毒包装体系包装病毒后感染人T细胞，获得LMP1 CAR-T细胞，体外实验验证LMP1 CAR-T细胞对感染EBV后的LMP1阳性淋巴瘤细胞的特异性细胞毒性作用。
结果①LMP1蛋白表达于EBV阳性的淋巴瘤细胞表面；②成功构建了二代LMP1 CAR慢病毒载体，感染人T细胞，获取LMP1 CAR-T细胞，感染效率大于80%；③LMP1 CAR-T细胞可特异性杀伤LMP1阳性淋巴瘤细胞，当效靶比按4∶1共培养48 h后，LMP1 CAR-T细胞对Raji细胞的杀伤作用增强，对Ramos细胞无明显杀伤作用；④与LMP1阳性淋巴瘤细胞按1∶1共培养5 h后，LMP1 CAR-T细胞处理组CD107a T细胞比例显著高于Vector-T细胞组[（13.25±2.94）%对（1.55±0.05）%，t＝3.972，P＝0.017]，脱颗粒效果增强；⑤与LMP1阳性淋巴瘤细胞共培养后，LMP1 CAR-T细胞组CD69 、CD25 T细胞比例显高于Vector-T细胞组[（7.40±0.41）%对（3.48±0.47）%，t＝6.268，P＝0.003；（73.00±4.73）%对（57.67±2.60）%，t＝2.842，P＝0.047]，活化效应增强。⑥与LMP1阳性淋巴瘤细胞共培养后，LMP1 CAR-T细胞组细胞因子分泌增强，高于Vector-T细胞组[IFN-γ：（703±73）ng/L对（422±87）ng/L，t＝2.478，P＝0.068；TNF-α：（215±35）ng/L对（125±2）ng/L，t＝2.536，P＝0.064]。
结论该研究证实EBV阳性淋巴瘤细胞表面可特异表达LMP1蛋白，成功构建了LMP1 CAR慢病毒载体并感染人T细胞，成功获得LMP1 CAR-T细胞。体外实验证实：与LMP1阳性淋巴瘤细胞共培养后，LMP1 CAR-T细胞脱颗粒效果增强，活化效应增强，高效分泌细胞因子，可特异杀伤LMP1阳性淋巴瘤细胞，具有潜在的临床应用前景。