甲型H1N1流感病毒实时荧光PCR诊断试剂盒的制备

来源 :中国生物制品学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wenlimm
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的制备甲型H1N1流感病毒实时荧光PCR诊断试剂盒,并进行验证。方法采用磁珠法从甲型H1N1流感疑似患者咽拭子样品中提取病毒RNA,逆转录合成cDNA。根据NCBI最新公布的大流行甲型H1N1流感病毒(2009)基因序列,设计针对编码基质蛋白M基因的引物和探针,检测甲型流感病毒;设计针对血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因特异性的引物和探针,检测甲型H1N1流感病毒;同时针对人的RNaseP基因设计用于内部控制的引物和探针。所有探针均为Taqman探针,5’端标记FAM,3’端标记BHQ1。对最佳荧光PCR反应条件进行优化,在此基础上组装成甲型H1N1流感病毒实时荧光PCR诊断试剂盒,对其特异性、灵敏度、精密性和稳定性进行验证。与市售试剂盒的检测结果进行对比,并对63份临床甲型H1N1流感疑似患者咽拭子样品进行检测。结果设计的PCR引物及探针能对甲型H1N1流感病毒进行准确检测,与流感病毒的其他型和亚型无交叉反应;试剂盒的灵敏度为0.004个血凝素单位;试验内变异系数小于2.5%,批间变异系数小于5%;试剂盒放置-20℃保存,稳定性良好;检测20份甲型H1N1流感疑似患者咽拭子样品的结果与市售试剂盒一致;检测63份流感疑似患者咽拭子样品,其中大流行甲型H1N1流感病毒阳性36份,普通甲型流感病毒阳性5份。结论所制备的甲型H1N1流感病毒实时荧光PCR诊断试剂盒具有较高的灵敏度、特异性、精密性和稳定性,可用于目前流行的甲型H1N1流感病毒的快速检测。
其他文献
【正】 1973年3月湖南省博物馆在衡阳地区文化组和衡阳市文化局等单位的大力支持和协助下,在衡阳市西南九公里的豪头山清理了五座东汉墓,其中一座有的墓砖上有"永元十四年"字
期刊
讨论了水泥加矿化剂煅烧和晶种法煅烧两种水泥熟料快烧技术的原理、实例及注意事项。
期刊
关于完善现有综合利用政策几点补充规定的通知为了进一步完善和落实国务院批转的国家经委《关于开展资源综合利用若干问题的暂行规定》国发(1985)117号文件,现将有关的几个具体问题补充
本文介绍了以天然气为燃料的Ф3.0/2.8×52m立筒预热器窑煅烧白水泥熟料生产线的生产调试过程,对在调试中出现的问题,进行了综合分析,针对具体问题采取了措施,使该条生产线由调试阶段进
为提高高强铝合金钨极氩弧焊的效率,以LD10铝合金为研究对象,将SiO2,TiO2混合物作为活性剂涂敷在试件表面,采用TIG方式进行焊接。研究SiO2,TiO2混合物作为活性剂对焊缝深宽比、显
以苏州火车站地下环形车道的营运通风方案为对象,对正常运营和火灾时的需风量进行计算和分析,并采用计算流体力学方法对车道火灾模式下排烟的有效性进行了模拟研究,确定该车
中国发明专利申请公开说明书CN101,117,678中公开了成都天河动力股份有限公司研发的一种新型活塞用Al—Si合金。该合金的化学成分的质量分数为:12.5%.13.5%Si,1.5%-2%Cu,0.9%-1.5%Mg,0~0.45%Mn,0.1
<正> 谈到厨房里的建材,许多人第一个反应就是联想到瓷砖。那是因为经常下厨,会令厨房的瓷砖容易积存油垢,久而久之便产生深刻印象。其实厨房里的材料选择,与使用者的烹饪习
“红灯停,绿灯行,黄灯亮了等一等!”这一人人皆知的交通法规可以保障道路的畅通。在教育学生的过程中我电有“黄灯亮了等一等”的体会。