一株普鲁兰酶产生菌的筛选及其基因克隆和酶学特性研究

来源 :生物技术进展 | 被引量 : 0次 | 上传用户:snower2010
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普鲁兰酶作为一种解支酶,能够特异地作用于多糖中的α-1,6糖苷键,将淀粉中高度分支的支链淀粉转变成直链淀粉。本文通过以普鲁兰糖为唯一碳源的功能平板筛选方法,从云南腾冲温泉淤泥中分离到1株产普鲁兰酶的菌株73号,经16S rDNA序列分析,该菌属于厌氧芽胞杆菌属(Anoxybacillus sp.)。通过普鲁兰酶的保守区片段扩增及序列比对,最终从该菌中克隆得到普鲁兰酶编码基因pul73,全长2121bp,编码706个氨基酸。将该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中进行异源表达和纯化,获得酶蛋白Pul73最适温度50℃,最适pH6.0,在65℃有较好的热稳定性,保温30min后仍有72%的剩余酶活。50℃时Pul73对普鲁兰糖的Km为1.643mg/mL,其最大反应速度Vmax为1.34U/mg,kcat为535.8/s。
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