背景:人羊膜上皮细胞来源稳定,正逐渐成为广受关注的再生医学种子细胞来源。目的:建立人羊膜上皮细胞体外分离培养、成脂、成软骨、成骨诱导分化的方法。方法:通过胰蛋白酶消化法从人胎盘羊膜中分离羊膜上皮细胞,进行体外培养与鉴定,观察培养12 d内的细胞生长曲线。取P1代羊膜上皮细胞,分别进行成脂、成软骨、成骨诱导,以常规培养细胞为对照,诱导16 d后,分别进行油红O染色、Masson染色及碱性磷酸酶染色,同时采用荧光定量PCR检测诱导过程中成脂转录因子、Ⅱ型胶原蛋白、骨桥蛋白、碱性磷酸酶m RNA表达变化。结果与结论:(1)从人羊膜中分离出的羊膜上皮细胞,免疫荧光检测表达上皮细胞标记物CK19;(2)P1代细胞具有较强的分裂增殖能力,P2细胞与P1相比增殖能力略有下降,P3细胞增殖能力最差;(3)羊膜上皮细胞经成脂、成软骨、成骨诱导后,油红O染色有红色脂滴,Masson染色有亮蓝色软骨基质,碱性磷酸酶染色有红褐色钙结节;随着诱导时间的延长,成脂转录因子、Ⅱ型胶原蛋白、骨桥蛋白、碱性磷酸酶表达量升高;(4)结果表明,采用酶消化法可从人羊膜中分离得到羊膜上皮细胞,羊膜上皮细胞可向脂肪细胞、成软骨细胞、成骨细胞分化。