【摘 要】
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目的 基于腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）通路探讨清燥救肺汤诱导Lewis荷瘤小鼠肺癌细胞自噬体膜及溶酶体形成的机制。方法 将50只雄性C57BL/6J小鼠随机分为模型组、环磷酰胺（CTX）组(50 mg·kg-1)、清燥救肺汤组(11 g·kg-1)、AMPK抑制剂组(Compound C,10 mg·kg-1)及清燥救肺汤+AMPK抑制剂组(11 g·kg-1清燥救肺汤+10 mg·kg-1Co
【基金项目】
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江西省自然科学基金项目（20202BAB206075）； 江西省教育厅科技项目（GJJ201202）； 江西省一流学科建设科研启动基金专项（JXSYLXK-ZHYI059）； 江西省中医药管理局中医药科技计划项目（2020A0325）； 2021年度江西中医药大学
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目的 基于腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）通路探讨清燥救肺汤诱导Lewis荷瘤小鼠肺癌细胞自噬体膜及溶酶体形成的机制。方法 将50只雄性C57BL/6J小鼠随机分为模型组、环磷酰胺（CTX）组(50 mg·kg-1)、清燥救肺汤组(11 g·kg-1)、AMPK抑制剂组(Compound C,10 mg·kg-1)及清燥救肺汤+AMPK抑制剂组(11 g·kg-1清燥救肺汤+10 mg·kg-1Compound C)。各组小鼠均右腋皮下注射Lewis肺癌细胞构建肺癌荷瘤模型。清燥救肺汤组和清燥救肺汤+AMPK抑制剂组需造模前14 d开始灌胃清燥救肺汤(11 g·kg-1·d-1)。造模24 h后，CTX组以50 mg·kg-1CTX隔日腹腔注射1次，共7次；AMPK抑制剂组和清燥救肺汤+AMPK抑制剂组均腹腔注射Compound C(10 mg·kg-1·d-1)，清燥救肺汤组和清燥救肺汤+AMPK抑制剂组继续按照设定剂量灌胃清燥救肺汤(11 g·kg-1·d-1)，连续14 d。采用Western Blot法检测肺癌组织自噬体膜形成相关蛋白[自噬关键分子酵母ATG6同系物（Beclin-1）、磷酸化自噬关键分子酵母ATG6同系物（p-Beclin-1）、Ⅲ型磷脂酰肌醇3-激酶（VPS34）、磷酸化Ⅲ型磷脂酰肌醇3-激酶（p-VPS34）]的表达水平；RT-q PCR法检测肺癌组织中自噬相关蛋白9A（ATG9A）、乙酰辅酶A合成酶2（ACSS2）、转录因子增强子3（TFE3） m RNA表达水平；免疫荧光双重染色法检测肺癌组织中自噬蛋白微管相关蛋白轻链3B（LC3B）及P62蛋白表达情况。结果与模型组比较，清燥救肺汤组和CTX组小鼠肺癌组织中Beclin-1、p-Beclin-1蛋白表达水平及p-Beclin-1/Beclin-1比值显著升高（P＜0.05,P＜0.01）,VPS34、p-VPS34蛋白表达水平及p-VPS34/VPS34比值均显著升高（P＜0.05,P＜0.01）,ATG9A、ACSS2 m RNA表达水平显著升高（P＜0.05,P＜0.01）,TFE3 m RNA表达水平显著降低（P＜0.01）,LC3B蛋白荧光强度表达水平显著升高（P＜0.01）,P62蛋白荧光强度表达水平显著降低（P＜0.01）。与清燥救肺汤组比较，清燥救肺汤+AMPK抑制剂组小鼠肺癌组织中p-Beclin-1蛋白表达水平及p-Beclin-1/Beclin-1比值显著降低（P＜0.05,P＜0.01）,VPS34、p-VPS34蛋白表达水平及p-VPS34/VPS34比值均显著降低（P＜0.05,P＜0.01）,ATG9A、ACSS2 m RNA表达水平显著降低（P＜0.05,P＜0.01）,TFE3 m RNA表达水平显著上升（P＜0.01）,LC3B蛋白荧光强度表达水平显著降低（P＜0.01）,P62蛋白荧光强度表达水平明显升高（P＜0.05）。与AMPK抑制剂组比较，清燥救肺汤+AMPK抑制剂组小鼠肺癌组织中Beclin-1、p-Beclin-1蛋白表达水平显著升高（P＜0.01）;VPS34、p-VPS34蛋白表达水平及p-VPS34/VPS34比值均显著升高（P＜0.01）;ATG9A、ACSS2 m RNA表达水平显著升高（P＜0.05,P＜0.01）。结论 清燥救肺汤诱导肺癌细胞自噬体膜及溶酶体形成的机制可能是通过激活Beclin-1、VPS34蛋白，上调ATG9A、ACSS2 m RNA表达，抑制TFE3 mRNA表达实现的。
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