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【摘要】 目的：分析P53和雌激素（ER）、孕激素（PR）受体表达与子宫肌瘤剔除术术后复发率之间的关系。方法：选取2013年4月-2014年10月本院收治的行子宫肌瘤剔除术治疗的患者90例作为研究对象，术后对患者随访观察，使用免疫组织化学法检测各个手术标本中子宫肌瘤组织及子宫肌瘤周的正常肌层组织中P53、ER和PR的表达量。结果：肌瘤组织中，P53、ER、PR的阳性表达率分别为76.67%、85.56%及90.0%，明显高于正常组织中的50.0%、41.11%及35.56%，比较差异均有统计学意义（P<0.05）；P53、ER、PR阳性表达者术后6个月及12个月的复发率均高于阴性表达者，比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：P53和雌、孕激素受体的高表达提示患者子宫肌瘤复发的可能性较高，与患者的预后相关，应在病理检测中检测其表达量，从而指导下一步的临床治疗，具有一定的临床参考价值。
【关键词】 复发； 子宫肌瘤； P53； 雌激素； 孕激素； 受体
子宫肌瘤好发于育龄期妇女，是女性生殖器中最常见的良性肿瘤，手术是治疗该病的主要方案，能够使患者的生育功能得以保留，但术后复发是影响患者预后的重要因素。有研究报道子宫肌瘤患者行剔除术治疗后，3年间的累积复发率约为20%～62%[1]。既往多认为子宫肌瘤组织内的雌激素受体（ER）及孕激素受体（PR）的过表达在促进肌瘤生长上发挥着重要的作用，在临床工作中给予孕激素受体拮抗剂后能够显著地抑制肌瘤的生长，且能够改善患者的临床表现，这也印证了雌、孕激素在子宫肌瘤中的重要作用[2]。而近年来，国内外研究发现P53突变在子宫肌瘤的发生和发展中发挥着重要的作用，并且可能与子宫肌瘤剔除术术后复发相关[3]。本研究采用回顾性分析选取2013年4月-2014年10月本院收治的90例子宫肌瘤患者临床资料，使用免疫组织化学法检测子宫肌瘤组织及子宫肌瘤周的肌层组织中P53和雌、孕激素受体表达，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取2013年4月-2014年10月本院收治的行子宫肌瘤剔除术治疗的患者90例作为研究对象，手术中均取肌瘤组织及瘤周肌层组织进行免疫组织化学检测，且均经病理诊断确诊为子宫肌瘤。患者年龄28～53岁，平均（39.5±6.1）岁，所有患者均为首次确诊，且未行任何治疗，无其他肿瘤病史和内分泌疾病。
1.2 方法 取肌瘤中心组织和肌瘤周边的肌层组织，放入4%的多聚甲醛中，经石蜡包埋，每个切片厚度制成4 μm，然后经过二甲苯脱脂、乙醇脱水，再使用PBS进行3次冲洗，冲洗4 min/次。试剂购买自福建迈新生物公司，按照SP法行免疫组化，然后抗原修复，DAB试剂显色，P53（基因突变型的P53）、ER、PR定位在胞核。
1.3 结果判定 随机选取5个高倍镜视野，取其均值对强度进行分级。免疫组化结果阳性呈棕黄色颗粒，阳性细胞数目≤5%即为-；阳性细胞数目6%～25%，表达强度即为+；阳性细胞数目25%～50%，即为++；阳性细胞数目50%～75%即为+++；阳性细胞数目75%以上，即为++++[4]。术后对所选患者进行定期随访，经阴道超声检查若检测出大于10 mm的子宫肌瘤则判定为术后复发，做出相应的记录。
1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验，计数资料以率（%）表示，采用 字2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 P53、ER、PR在肌瘤组织及正常组织中的表达情况 在肌瘤组织中，P53、ER、PR的阳性表达率分别为76.67%、85.56%及90.0%，明显高于正常组织中的50.0%、41.11%及35.56%，比较差异有统计学意义（P<0.05），见表1。
2.2 肌瘤组织中P53、ER、PR的表达情况与术后复发之间的关系 在子宫肌瘤患者中，P53、ER、PR阳性表达者术后6、12个月的复发率均高于阴性表达者，比较差异有统计学意义（P<0.05），见表2。
3 讨论
子宫肌瘤为妇科常见疾病，多数患者可无明显的临床症状，不易被发现，而有部分患者的临床表现较为明显，常见的有腹部胀痛、月经失调及腰部不适等，对患者的生活和工作造成影响，降低了生活质量。该病正向年轻化趋势发展，越来越多的患者要求保留子宫行手术治疗，使其保留了生育功能，但术后复发的几率升高，是近年来关于子宫肌瘤研究的热点[5]。多数学者认为，子宫肌瘤的起源、发展和生长与肿瘤细胞的生长因子、激素表达和增殖状态等因素密切相关[6]。
在子宫肌瘤手术后复发的研究上，国内外进行了较多的试验研究雌、孕激素在子宫肌瘤的病因学中的研究广泛[7]。据Mittal等[8]报道，作为激素依懒性肿瘤，雌激素在子宫肌瘤的发生及发展上起着重要的促进作用，孕激素对子宫肌瘤的生长也有重要的作用。本次研究中，笔者通过对肌瘤组织及正常组织进行免疫组织化学染色，发现在肌瘤组织中ER、PR的阳性表达率分别为85.56%及90.0%，明显高于正常组织中的41.11%和35.56%，比较差异有统计学意义（P<0.05），表明ER和PR在子宫肌瘤中高表达，使肿瘤细胞对雌、孕激素的敏感性升高，在肿瘤局部为激素高度活化状态，能够不断的刺激肿瘤细胞增殖、分裂。同时也说明ER、PR的高表达与子宫肌瘤的生长高度相关，这与文献[9]的研究结果相符。笔者通过对所选患者进行定期随访，发现在子宫肌瘤患者中ER、PR阳性表达者术后复发率及术后复发时间均高于阴性表达者，比较差异有统计学意义（P<0.05），表明ER、PR与子宫肌瘤手术后复发密切相关。因而在病理检查时，应该对ER和PR进行染色，从而预测患者术后复发的几率，对表达阳性患者应加强随访，从而给予相应的治疗方案。 P53是抑癌基因，在乳腺癌、肝癌、宫颈癌等多种肿瘤有广泛的参与，它参与了抑制肿瘤细胞的生长和分化[10-12]。在多种致瘤因素的刺激下，P53可以发生突变，失去抑制肿瘤生长的作用，并可能诱发肿瘤的生长[13-16]。据Glace等[17]报道，在经过野生型P53刺激后，P53基因可以向恶性表型转化，成为致癌基因促进肿瘤的发展。突变后的P53会在肿瘤中不断蓄积，表达水平显著高于正常组织，通过对肿瘤组织进行P53蛋白的免疫组织化学染色能够反应P53基因突变情况[18-20]。本研究中，笔者通过对肌瘤组织及正常组织进行免疫组织化学染色，发现在肌瘤组织中P53的阳性表达率为76.67%，明显高于正常组织中的50.0%，比较差异有统计学意义（P<0.05）。通过定期随访，发现在子宫肌瘤患者中，P53阳性表达者术后6个月和12个月的复发率均高于阴性表达者，比较差异有统计学意义（P<0.05），表明突变P53在子宫肌瘤中高表达，并与子宫肌瘤术后复发有着密切的关系。本研究存在随访时间较短的不足，会在以后的时间里继续对研究对象进行随访，追踪远期的复发情况。
综上所述，在子宫肌瘤中P53和雌、孕激素受体的高表达提示患者复发的可能性较高，与患者的预后相关，应在病理检测中检测其表达量，从而指导下一步的临床治疗，有一定的临床参考价值。
参考文献
[1]彭刿.腹腔镜子宫肌瘤剔除术治疗前后的子宫动脉血流变化研究[J].中国医学创新，2013，10（9）：103-104.
[2]黄雪萍，吴雄健.两种方法治疗子宫肌瘤的疗效及对血清性激素水平影响[J].中国医学创新，2013，10（36）：30-32.
[3]李灵燕，李留霞，张颖，等.不同术式特殊部位子宫肌瘤剔除术的临床效果比较[J].中国医学创新，2014，11（31）：21-23.
[4]蔡金华，方华盛.29例子宫肌瘤的低场MRI表现分析[J].中国医学创新，2012，9（9）：65-66.
[5]钱月芳.腹腔镜及开腹行子宫肌瘤剜除术的疗效观察[J].中国医学创新，2014，11（32）：28-30.
[6] BayturY B，Ozbilgin K，Cilaker S，et al.A comparative study of the effect of raloxifene and gosereline on uterine leiomyoma volume changes and estrogen receptor， progesterone receptor， bcl-2 and p53 expression immunohistochemically in premenopausal women[J].European Journal of Obstetrics，Gynecology and Reproductive Biology，2007，135（1）：94-103.
[7]刘蓉，秦嶽.K-Ras和P53基因突变与子宫肌瘤发生和术后复发的关系[J].中国肿瘤生物治疗杂志，2013，20（5）：586-589.
[8] Mittal K R，Chen F，Wei J J，et al.Molecular and immuno-histochemical evidence for the origin of uterine leiomyosarcomas from associated leiomyoma and symplastic ieiomyoma-like areas[J].Modern Pathology，2009，22（10）：1303-1311.
[9] Suzuki A，Kariya M，Matsumura M，et al.Expression of p53 and p21（WAF-1）， apoptosis， and proliferation of smooth muscle cells in normal myometrium during the menstrual cycle： implication of DNA damage and repair for leiomyoma development[J].Medical Molecular Morphology，2012，45（4）：214-221.
[10]倪小平，雷丽红，李丽燕，等.雌、孕激素受体及表皮生长因子受体表达与子宫肌瘤术后复发的相关性研究[J].中国医师进修杂志，2012，35（6）：25-27.
[11]王植红.新型雌激素受体GPR30在子宫内膜癌中的表达及其临床意义[J].中国医学创新，2012，9（20）：145.
[12]古再力努尔·塔依尔.探讨小剂量米非司酮治疗子宫肌瘤的临床效果[J].中国医学创新，2012，10（10）：31-32.
[13]颜丽娜，郭萍.剖宫产同时行子宫肌瘤切除术118例回顾性分析[J].中国医学创新，2014，11（1）：67-69.
[14]刘慧.子宫全切术对卵巢功能影响的临床研究[J].中国医学创新，2013，10（28）：34-36.
[15]李弦，吴晓玲，周美，等.子宫肌瘤患者IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平变化与ER、PR的关系研究[J].河北医药，2015，10（19）：2986-2987.
[16] Fernández-Montolí M E，Díez-Gibert O，Samaniego J M，et al.Total and unbound cytosolic estrogen and progesterone receptors in myometrium and fibroid after gonadotropin-releasing hormone agonist treatment[J].Fertility and Sterility，1995，63（3）：522-527.
[17] Glace L，Grygielko E T，Boyle R，et al.Estrogen-induced stromal cell-derived factor-1 （SDF-1/Cxcl12） expression is repressed by progesterone and by selective estrogen receptor modulators via estrogen receptor alpha in rat uterine cells and tissues[J].Steroids，2009，74（13-14）：1015-1024.
[18]蔡兴苑，卢丹，魏薇，等.子宫肌瘤剔除术后复发情况及相关危险因素分析[J].实用妇产科杂志，2015，31（5）：358-360.
[19]赵艳，马瑞华.腹腔镜子宫肌瘤剔除术与开腹手术治疗后肌瘤残留复发及妊娠结局的对比分析[J].中国实用医药，2013，8（1）：43-44.
[20]Malartic C，Morel O，Rivain A L，et al.Evaluation of symptomatic uterine fibroids in candidates for uterine artery embolization：Comparison between ultrasonographic and MR imaging findings in 68 consecutive patients[J].Clinical Imaging，2013，37（1）：83-90.
（收稿日期：2016-01-18） （本文编辑：；李颖）
【关键词】 复发； 子宫肌瘤； P53； 雌激素； 孕激素； 受体
子宫肌瘤好发于育龄期妇女，是女性生殖器中最常见的良性肿瘤，手术是治疗该病的主要方案，能够使患者的生育功能得以保留，但术后复发是影响患者预后的重要因素。有研究报道子宫肌瘤患者行剔除术治疗后，3年间的累积复发率约为20%～62%[1]。既往多认为子宫肌瘤组织内的雌激素受体（ER）及孕激素受体（PR）的过表达在促进肌瘤生长上发挥着重要的作用，在临床工作中给予孕激素受体拮抗剂后能够显著地抑制肌瘤的生长，且能够改善患者的临床表现，这也印证了雌、孕激素在子宫肌瘤中的重要作用[2]。而近年来，国内外研究发现P53突变在子宫肌瘤的发生和发展中发挥着重要的作用，并且可能与子宫肌瘤剔除术术后复发相关[3]。本研究采用回顾性分析选取2013年4月-2014年10月本院收治的90例子宫肌瘤患者临床资料，使用免疫组织化学法检测子宫肌瘤组织及子宫肌瘤周的肌层组织中P53和雌、孕激素受体表达，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取2013年4月-2014年10月本院收治的行子宫肌瘤剔除术治疗的患者90例作为研究对象，手术中均取肌瘤组织及瘤周肌层组织进行免疫组织化学检测，且均经病理诊断确诊为子宫肌瘤。患者年龄28～53岁，平均（39.5±6.1）岁，所有患者均为首次确诊，且未行任何治疗，无其他肿瘤病史和内分泌疾病。
1.2 方法 取肌瘤中心组织和肌瘤周边的肌层组织，放入4%的多聚甲醛中，经石蜡包埋，每个切片厚度制成4 μm，然后经过二甲苯脱脂、乙醇脱水，再使用PBS进行3次冲洗，冲洗4 min/次。试剂购买自福建迈新生物公司，按照SP法行免疫组化，然后抗原修复，DAB试剂显色，P53（基因突变型的P53）、ER、PR定位在胞核。
1.3 结果判定 随机选取5个高倍镜视野，取其均值对强度进行分级。免疫组化结果阳性呈棕黄色颗粒，阳性细胞数目≤5%即为-；阳性细胞数目6%～25%，表达强度即为+；阳性细胞数目25%～50%，即为++；阳性细胞数目50%～75%即为+++；阳性细胞数目75%以上，即为++++[4]。术后对所选患者进行定期随访，经阴道超声检查若检测出大于10 mm的子宫肌瘤则判定为术后复发，做出相应的记录。
1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验，计数资料以率（%）表示，采用 字2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 P53、ER、PR在肌瘤组织及正常组织中的表达情况 在肌瘤组织中，P53、ER、PR的阳性表达率分别为76.67%、85.56%及90.0%，明显高于正常组织中的50.0%、41.11%及35.56%，比较差异有统计学意义（P<0.05），见表1。
2.2 肌瘤组织中P53、ER、PR的表达情况与术后复发之间的关系 在子宫肌瘤患者中，P53、ER、PR阳性表达者术后6、12个月的复发率均高于阴性表达者，比较差异有统计学意义（P<0.05），见表2。
3 讨论
子宫肌瘤为妇科常见疾病，多数患者可无明显的临床症状，不易被发现，而有部分患者的临床表现较为明显，常见的有腹部胀痛、月经失调及腰部不适等，对患者的生活和工作造成影响，降低了生活质量。该病正向年轻化趋势发展，越来越多的患者要求保留子宫行手术治疗，使其保留了生育功能，但术后复发的几率升高，是近年来关于子宫肌瘤研究的热点[5]。多数学者认为，子宫肌瘤的起源、发展和生长与肿瘤细胞的生长因子、激素表达和增殖状态等因素密切相关[6]。
在子宫肌瘤手术后复发的研究上，国内外进行了较多的试验研究雌、孕激素在子宫肌瘤的病因学中的研究广泛[7]。据Mittal等[8]报道，作为激素依懒性肿瘤，雌激素在子宫肌瘤的发生及发展上起着重要的促进作用，孕激素对子宫肌瘤的生长也有重要的作用。本次研究中，笔者通过对肌瘤组织及正常组织进行免疫组织化学染色，发现在肌瘤组织中ER、PR的阳性表达率分别为85.56%及90.0%，明显高于正常组织中的41.11%和35.56%，比较差异有统计学意义（P<0.05），表明ER和PR在子宫肌瘤中高表达，使肿瘤细胞对雌、孕激素的敏感性升高，在肿瘤局部为激素高度活化状态，能够不断的刺激肿瘤细胞增殖、分裂。同时也说明ER、PR的高表达与子宫肌瘤的生长高度相关，这与文献[9]的研究结果相符。笔者通过对所选患者进行定期随访，发现在子宫肌瘤患者中ER、PR阳性表达者术后复发率及术后复发时间均高于阴性表达者，比较差异有统计学意义（P<0.05），表明ER、PR与子宫肌瘤手术后复发密切相关。因而在病理检查时，应该对ER和PR进行染色，从而预测患者术后复发的几率，对表达阳性患者应加强随访，从而给予相应的治疗方案。 P53是抑癌基因，在乳腺癌、肝癌、宫颈癌等多种肿瘤有广泛的参与，它参与了抑制肿瘤细胞的生长和分化[10-12]。在多种致瘤因素的刺激下，P53可以发生突变，失去抑制肿瘤生长的作用，并可能诱发肿瘤的生长[13-16]。据Glace等[17]报道，在经过野生型P53刺激后，P53基因可以向恶性表型转化，成为致癌基因促进肿瘤的发展。突变后的P53会在肿瘤中不断蓄积，表达水平显著高于正常组织，通过对肿瘤组织进行P53蛋白的免疫组织化学染色能够反应P53基因突变情况[18-20]。本研究中，笔者通过对肌瘤组织及正常组织进行免疫组织化学染色，发现在肌瘤组织中P53的阳性表达率为76.67%，明显高于正常组织中的50.0%，比较差异有统计学意义（P<0.05）。通过定期随访，发现在子宫肌瘤患者中，P53阳性表达者术后6个月和12个月的复发率均高于阴性表达者，比较差异有统计学意义（P<0.05），表明突变P53在子宫肌瘤中高表达，并与子宫肌瘤术后复发有着密切的关系。本研究存在随访时间较短的不足，会在以后的时间里继续对研究对象进行随访，追踪远期的复发情况。
综上所述，在子宫肌瘤中P53和雌、孕激素受体的高表达提示患者复发的可能性较高，与患者的预后相关，应在病理检测中检测其表达量，从而指导下一步的临床治疗，有一定的临床参考价值。
参考文献
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[7]刘蓉，秦嶽.K-Ras和P53基因突变与子宫肌瘤发生和术后复发的关系[J].中国肿瘤生物治疗杂志，2013，20（5）：586-589.
[8] Mittal K R，Chen F，Wei J J，et al.Molecular and immuno-histochemical evidence for the origin of uterine leiomyosarcomas from associated leiomyoma and symplastic ieiomyoma-like areas[J].Modern Pathology，2009，22（10）：1303-1311.
[9] Suzuki A，Kariya M，Matsumura M，et al.Expression of p53 and p21（WAF-1）， apoptosis， and proliferation of smooth muscle cells in normal myometrium during the menstrual cycle： implication of DNA damage and repair for leiomyoma development[J].Medical Molecular Morphology，2012，45（4）：214-221.
[10]倪小平，雷丽红，李丽燕，等.雌、孕激素受体及表皮生长因子受体表达与子宫肌瘤术后复发的相关性研究[J].中国医师进修杂志，2012，35（6）：25-27.
[11]王植红.新型雌激素受体GPR30在子宫内膜癌中的表达及其临床意义[J].中国医学创新，2012，9（20）：145.
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[13]颜丽娜，郭萍.剖宫产同时行子宫肌瘤切除术118例回顾性分析[J].中国医学创新，2014，11（1）：67-69.
[14]刘慧.子宫全切术对卵巢功能影响的临床研究[J].中国医学创新，2013，10（28）：34-36.
[15]李弦，吴晓玲，周美，等.子宫肌瘤患者IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平变化与ER、PR的关系研究[J].河北医药，2015，10（19）：2986-2987.
[16] Fernández-Montolí M E，Díez-Gibert O，Samaniego J M，et al.Total and unbound cytosolic estrogen and progesterone receptors in myometrium and fibroid after gonadotropin-releasing hormone agonist treatment[J].Fertility and Sterility，1995，63（3）：522-527.
[17] Glace L，Grygielko E T，Boyle R，et al.Estrogen-induced stromal cell-derived factor-1 （SDF-1/Cxcl12） expression is repressed by progesterone and by selective estrogen receptor modulators via estrogen receptor alpha in rat uterine cells and tissues[J].Steroids，2009，74（13-14）：1015-1024.
[18]蔡兴苑，卢丹，魏薇，等.子宫肌瘤剔除术后复发情况及相关危险因素分析[J].实用妇产科杂志，2015，31（5）：358-360.
[19]赵艳，马瑞华.腹腔镜子宫肌瘤剔除术与开腹手术治疗后肌瘤残留复发及妊娠结局的对比分析[J].中国实用医药，2013，8（1）：43-44.
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（收稿日期：2016-01-18） （本文编辑：；李颖）