【摘 要】
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目的 基于Kelch样ECH相关蛋白1/核因子E2相关因子2(Kelch-like ECH-associated protein-1/nuclear factor E2-related factor2,Keap1/Nrf2)通路介导的自噬探讨紫草素对膀胱上
【机 构】
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南阳市中心医院肿瘤内科,河南南阳473000;郑州大学药学院研究室,河南郑州450052
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目的 基于Kelch样ECH相关蛋白1/核因子E2相关因子2(Kelch-like ECH-associated protein-1/nuclear factor E2-related factor2,Keap1/Nrf2)通路介导的自噬探讨紫草素对膀胱上皮癌BUC细胞化疗敏感性的影响.方法 体外培养人BUC细胞BIU-87,CCK-8法检测不同质量浓度(10、20、40、80、 160 μg/mL)顺铂和不同浓度(2、4、8、16、32 μmol/L)紫草素+顺铂(40 μg/mL)对BIU-87细胞增殖的影响.细胞转染实验,设置对照组、顺铂组(40 μg/mL)、紫草素组(40 μg/mL顺铂+8 μmol/L紫草素)和NC组(转染negative control-Nrf2+40 μg/mL顺铂+8μmol/L紫草素)和Nrf2组(转染hsa-Nrf2 mimic +40 μg/mL顺铂+8 μmol/L紫草素),实时荧光定量PCR (qRT-PCR)法检测转染后BIU-87细胞中Nrf2 rnRNA表达情况;CCK-8法检测各组BIU-87细胞增殖情况;流式细胞仪检测各组BIU-87细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测BIU-87细胞中Keap1、Nrf2、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白表达情况.结果 与对照组相比,10、20、40、80、160 μg/mL顺铂可显著抑制BIU-87细胞增殖(P＜0.05);2、4、8、16、32 μmol/L紫草素联合顺铂可显著抑制BIU-87细胞增殖(P＜0.05).细胞转染实验中,与对照组相比,顺铂组BIU-87细胞增殖抑制率、凋亡率、细胞中Nrf2和LC3Ⅱ蛋白表达水平显著升高,细胞中Keap1、LC3Ⅰ蛋白表达水平显著降低(P＜0.05);与顺铂组相比,紫草素组BIU-87细胞增殖抑制率、凋亡率、细胞中Keap1和LC3Ⅰ蛋白表达水平显著升高,Nrf2和LC3Ⅱ蛋白表达水平显著降低(P＜0.05);紫草素组、NC组以上指标差异不具有统计学意义(P＞0.05);与NC组相比,Nrf2组BIU-87细胞增殖抑制率、凋亡率、细胞中Keap1、LC3Ⅰ蛋白表达水平显著降低,Nrf2蛋白和mRNA及LC3Ⅱ蛋白表达水平显著升高(P＜0.05).结论 紫草素可能通过抑制Keap1/Nrf2通路介导的自噬反应,增强BUC细胞BIU-87对顺铂的敏感性.
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