酿酒葡萄品种SSR-PCR体系的优化与建立

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以酿酒葡萄品种为原料,研究了聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)体系的主要成分对葡萄简单序列重复(simple sequence repeats,SSR)扩增结果的影响,并确定了各成分的最佳用量。以改良的十六烷基三甲基溴化铵法(hexadecyl trimethyl ammonium bromide,CTAB)从葡萄中提取基因组DNA,通过单因素试验分析SSR-PCR体系中主要成分Mg2+浓度、d NTPs浓度、Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度和模板DNA浓度对葡萄SSR-PCR反应体系扩增效果的影响。同时,采用正交优化设计试验确立酿酒葡萄SSR-PCR最佳25μL反应体系为Mg2+浓度为2.5 mmol/L,d NTPs为0.15 mmol/L,Taq DNA聚合酶为1.5 U,引物为0.5μmol/L,DNA含量为40 ng/25μL。通过优化试验的直观分析和方差分析得出PCR体系的主要成分对扩增结果的影响程度依次为:Mg2+>Taq DNA聚合酶>d NTPs>引物>模板DNA。利用此体系对4个酿酒葡萄品种DNA进行SSR-PCR反应体系扩增并进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,结果扩增条带清晰稳定,说明该体系可用于酿酒葡萄品种SSR标记的研究。
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