【摘 要】
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目的:类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是以慢性炎症和关节破坏为主要特征的自身免疫性疾病.炎症反应、氧化应激是RA发病的重要环节,氧化损伤能够诱发和加重免疫炎症失衡,促进细胞和组织损伤.本研究观察长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)LINC00638在RA湿热痹阻证患者外周血中的表达,旨在研究LINC00638与疾病活动度、免疫炎症、氧化应激指标的相关性,探讨LINC00638在过表达和干扰情况下调控RA滑膜样成纤维细胞(fibroblast
【机 构】
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安徽中医药大学研究生院,合肥230031;安徽中医药大学第一附属医院风湿科,合肥230031
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目的:类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是以慢性炎症和关节破坏为主要特征的自身免疫性疾病.炎症反应、氧化应激是RA发病的重要环节,氧化损伤能够诱发和加重免疫炎症失衡,促进细胞和组织损伤.本研究观察长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)LINC00638在RA湿热痹阻证患者外周血中的表达,旨在研究LINC00638与疾病活动度、免疫炎症、氧化应激指标的相关性,探讨LINC00638在过表达和干扰情况下调控RA滑膜样成纤维细胞(fibroblast-like synoviocyte,FLS)的炎症反应与氧化应激的机制.方法:纳入安徽中医药大学第一附属医院风湿科48例RA湿热痹阻证患者和27例正常健康者,将其分为RA组和对照组.采用real-time PCR检测受试者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中LINC00638的表达.采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中白介素(interleukin,IL)-10、IL-17、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)、超氧化物歧化酶2(superoxide dismutase 2,SOD2)的表达.采用Spearman方法研究RA患者LINC00638与红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、类风湿因子(rheumatoid factor,RF)、抗环瓜氨酸肽抗体(anti-cyclic citrullinated peptide antibody,anti-CCP)的相关性,并观察其与28处关节疾病活动评分(Disease Activity Scores for 28 Joints,DAS28)、RA湿热证候量化积分、视觉模拟评分(Visual Analogue Scale,VAS)、焦虑自评量表(Self-rating Anxiety Scale,SAS)、抑郁自评量表(Self-rating Depression Scale,SDS)评分的关系.以RA-PBMC诱导RA-FLS,建立RA体外细胞实验模型,构建LINC00638过表达质粒和小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),并将其转染至RA-FLS中.细胞实验分为4组:pcDNA3.1-对照组、pcDNA3.1-LINC00638组、siRNA-对照组、siRNA-LINC00638组.采用real-time PCR检测过表达质粒和siRNA转染效率,ELISA法检测各组TNF-α、IL-10表达,免疫荧光法检测各组抗氧化蛋白HO-1、SOD2的表达.结果:与对照组相比,LINC00638在RA组外周血中呈低表达(P<0.01),LINC00638的受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线下面积(area under curve,AUC)为0.9271.RA组DAS28评分为5.70(5.40～6.50),RA湿热证候量化积分为20.00(17.00～23.00),VAS评分为7.00(6.30～8.00).与对照组相比,RA组ESR、CRP、RF、anti-CCP、SAS评分、SDS评分均显著升高(均P<0.01).Spearman相关性分析结果显示:RA湿热痹阻证患者LINC00638与ESR(r=?0.532,P<0.01)、CRP(r=?0.367,P<0.05)、TNF-α(r=?0.375,P<0.01)、MDA(r=?0.295,P<0.05)、DAS28(r=?0.450,P<0.01)均呈负相关,与SOD2呈正相关(r=0.370,P<0.05).RA-FLS经RA-PBMC诱导后,LINC00638表达水平显著降低(P<0.01),表明PBMC的刺激能够有效降低RA-FLS的LINC00638表达,故可采用PBMC诱导的RA-FLS实验模型.与pcDNA3.1-对照组相比,pcDNA3.1-LINC00638组LINC00638、IL-10、SOD2、HO-1表达均显著升高(均P<0.01),TNF-α的表达降低(P<0.01);与siRNA对照组相比,siRNA-LINC00638组LINC00638、IL-10、SOD2、HO-1均显著降低(均P<0.01),TNF-α显著升高(P<0.01).结论:LINC00638在RA湿热痹阻证患者外周血中呈低表达,与疾病活动度、免疫炎症、氧化应激指标存在相关性.过表达LINC00638能够降下调促炎因子,上调抑炎因子,提高抗氧化酶活性,从而可改善RA炎症与氧化应激.LINC00638是本课题组前期对RA患者外周血PBMC进行全转录组高通量测序,以及临床样本验证所得到的差异lncRNA.为深化该基因在分子生物学中研究,可从竞争性内源RNA角度进一步研究LINC00638靶向的微小RNA与mRNA.
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