【摘 要】
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目的 构建携带前列腺特异性膜抗原(PSMA)基因的复制缺陷型腺病毒载体,并检测其在真核细胞中的表达.方法 利用质粒pET-30a-PSMA行PCR扩增、酶切获得PSMA cDNA片段,并插入腺病
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目的 构建携带前列腺特异性膜抗原(PSMA)基因的复制缺陷型腺病毒载体,并检测其在真核细胞中的表达.方法 利用质粒pET-30a-PSMA行PCR扩增、酶切获得PSMA cDNA片段,并插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV的启动子下游,构建重组穿梭载体pAdTrack-CMV-PSMA,线性化后与骨架质粒pAdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组得到腺病毒质粒pAd-PSMA,经293A细胞包装成复制缺陷型腺病毒Ad-PSMA.将Ad-PSMA体外感染DU145细胞,蛋白质印迹法检测目的基因表达.结果 构建了携带PSMA基因的复制缺陷型腺病毒,病毒滴度1.4×109 pfu/ml,能有效感染DU145细胞,转染率约95%,并经蛋白质印迹法检测到相对分子质量约100 000的目的蛋白PSMA在DU145中表达.结论 成功构建了表达PSMA基因的复制缺陷型腺病毒载体,为开展靶向PSMA的基因免疫治疗提供了实验基础.
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