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【摘 要】建立一种高效液相色谱同时测定食品中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸的方法，实验选择条件是赛默飞ACES C18 Plus反相色谱柱（250*4.6 *5um），柱温30℃，甲醇与0.02mol/L乙酸铵水溶液比例为5：95，流速为1.00mL/min，PDA检测器，在波长为230nm下检测，该方法样品前处理简单，回收率、精密度和准确度良好，在常规检测中非常实用。
【关键词】高效液相色谱、安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠
脱氢乙酸
食品添加剂是添加到食品中以保持风味或增强口感，改善外观或其他品质的物质。食品添加剂用途可以分为防腐剂、甜味剂、着色剂，增稠剂等。食品安全国家标准《食品添加剂使用标准GB 2760-2014》规定了不同食品中可以使用的食品添加剂的种类和限量，按照标准要求，使用添加剂对食品工业发展、食品安全、延长食品保质期有重要的作用，但是违规使用或超量使用添加剂就会给人体带来危害。目前测定食品添加剂的方法主要有气相色谱法，液相色谱法，气相色谱质谱连用法，液相色谱质谱连用法等。本文涉及的五种食品添加剂主要是运用高效液相色谱法，根据食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的测定（GB 5009.28-2016）、食品安全国家标准食品中脱氢乙酸的测定（GB 5009.121-2016）、饮料中乙酰磺胺酸钾的测定（GB/T 5009.140-2003），对于同一食品样品，需要多个标准，进行多次检验，效率较低，给基层工作者带来很大的工作难度。需建立一种简单、通用的方法，能同时测定多种食品添加剂。对比国标方法本法案具有，前处理步骤简单、回收率高、方法稳定性好、灵敏度和准确度高等优点。
1材料与方法：
1.1仪器设备
1、高效液相色谱仪（配二极管阵列检测器，Thermo scientific ultiMate 3000）2、KQ3200DE型数控超声波清洗器3、METTLER TOLEDO酸度计4、ELITIST 21K-R 高速冷冻离心机5、天津天马衡基万分之一的天平。
1.2材料与试剂
1、安赛蜜：浓度1.00mg/mL（中国计量科学研究院;2、苯甲酸：浓度1.00mg/mL（中国计量科学研究院;3、山梨酸：浓度1.00mg/mL（中国计量科学研究院4、糖精钠;浓度1.00mg/mL（中国计量科学研究院5、脱氢乙酸（Dehydroacetic Acid，25G，CAS：520-45-6）（纯度98%）6、甲醇：（色谱纯，美国Fisher公司7、氨水（优级纯）8、无水乙醇（分析纯）9、正己烷（分析纯）9、超纯水
（1）脫氢乙酸（98.0%）储备液。用10mL 20g/L的氢氧化钠溶液溶解，加水配置成1.00mg/mL的储备液。
（2）0.02mol/L乙酸铵溶液。称取1.54g优级纯的乙酸铵用水溶解后定容至1000mL，经0.22um滤膜过滤超声后备用。
（3）220g/L乙酸锌溶液，称取220g分析纯乙酸锌溶于少量水中，加入30mL冰乙酸，用水定容至1000mL.
（4）106g/L亚铁氰化钾溶液。称取106g亚铁氰化钾用水定容至1000mL.
（5）20g/L氢氧化钠溶液。称取20g分析纯氢氧化钠用水溶解后定容至1000mL.
（6）氨水溶液（1+99）.取氨水1mL，加99mL水中，混匀。
实验方案：
1.3试验方法
1.3.1色谱柱：（ACES C18Plus 250*4.6 SN：4F30809），流动相：甲醇：乙酸铵=5：95，总流速：1.00mL/min，柱压：69MPa，柱温：30℃，检测波长：230nm，进样体积：10uL，采集时间：25min.
1.3.2标准溶液的配制：
分别准确吸取安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸标准储备液（1000mg/L）各10mL于100mL容量瓶中，用水定容成混合标准中间溶液（100mg/L）.分别准确吸取混合标准储备液0.0、0.10、0.50、1.00、2.00、5.00、10.00于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，配制成质量浓度为：0.00、1.00、5.00、10.0、20.0、50.0、100mg/L，经0.22um水系滤头过滤后上机检测，绘制标准曲线。
样品前处理：
（1）液体样品：碳酸饮料、配制酒、酱油、醋等液体样品，称取混匀样品2-5g（精确至0.0001g），放入50mL的比色管中，用水定容至刻度，混匀，过0.22um微孔滤膜过滤，滤液待机分析，含蛋白较多的液体样品各加5mL的亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白。
（2）固体样品：含油脂较多的试样，精确称取2-5g试样于100mL比色管中，加10mL正己烷，于60水浴加热5min，轻摇以溶解脂肪，然后加氨水溶液（1+99）50mL，无水乙醇2mL，弃去有机相，水相转移至100mL比色管中。一般固体试样精确称取2-5g样品于100mL的比色管中，加入50mL的水，摇匀浸泡30min.分别在上述样液中各加5mL的亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白，最后定容、静置，取上层液经0.22um水系滤头过滤后上机。采用外标准与标准曲线比较定量。待测样液待测组分浓度应在标准曲线范围内，超出曲线应将样液稀释后再进行分析。
结果计算：样中待测组分含量的计算公式如（1）所示。
式（1）中，X为试样中待测组分含量，g/kg。
c为由标准曲线得出的试样中待测物的质量浓度，mg/L.
v为试样定容体积，mL.
1000为mg/kg转换为g/kg的换算因子。
2 实验结果与分析： 2.1波长选择
实验中对安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸5种添加剂进行波长扫描，发现最大吸收波长分别在：225.4nm、219.2nm、228.7nm、255.0nm、310.8nm处（其中脱氢乙酸的最大吸收波长310.8nm处有干扰，而次级波长为230.2nm），综合考虑各组分的灵敏度，本实验选择的波长为230nm.
2.2流动相选择
如果选乙腈和0.02mol/L乙酸铵水溶液为流动相时，由于乙腈洗脱能力强，还没分离就被冲了下来。无法达到分离效果。如果提高甲醇比例，会使糖精钠和脱氢乙酸叠加在一起。实验中采用甲醇与0.02mol/L乙酸铵水溶液做流动相，流速为1.0mL/min.甲醇与乙酸氨水溶液流动相比例为5：95时，分离效果最好。
2.3 线性回归方程、检出限和回收率
将配制好的标准曲线上机分析，得到每种物质线性方程，在线性范围内较好，相关系数R均大于0.998，以3倍噪声为检出限，以饮料为代表样品，添加低水平的5种混标，每个水平重复测定6次，计算平均回收率和精密度，结果见表1。5种添加剂的加标回收率为96.4%-98.5%，相对标准偏差为1.02%-1.89%。
3 结论：
本文建立一种同时测定食品中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸5种食品添加剂的液相色譜法，解决了国家标准不能同时检测的弊端，适用范围基本上覆盖了所有食品类别，通过二极管检测器对定性结果做了进一步论证，提高了检测结果的准确性，该方法耗时短，操作简单，适用于样品的快速检验，可作为国家标准的补充进行推广。
参考文献：
[1]中华人民共和国卫生部GB 2760-2014 食品安全国家标准食品添加剂使用标准[S]。北京：中国标准出版社，2014。
[2]中华人民共和国卫生部GB/T 5009.28-2016食品中苯甲酸，山梨酸和糖精钠的测定[S]。北京：中国标准出版社，2016。
[3]中华人民共和国卫生部GB/T 5009.121-2016食品中脱氢乙酸的测定[S]。北京中国标准出版社，2016。
[4]中华人民共和国卫生部GB/T 5009.1402003饮料中乙酰磺胺酸钾的测定[S]。北京中国标准出版社，2003。
[5]方小丽，超高液相色谱法同时测定饮料中食品添加剂[J]，食品工业，2018，39（12）：314-318
[6]苏建国，彭进.UPLC同时测定风味饮料中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸方法研究[J]。中国食品添加剂，2011，22（2）：243-245.
[7]张春玲.高效液相色谱法同时测定食品中的苯甲酸、山梨酸、糖精钠[J]，中国卫生检验杂志，2007，17（5）：936-937.
作者简介：
刘晓霞（1981年-），女，山西临汾人，临汾市综合检验检测中心工程师，大学本科。
【关键词】高效液相色谱、安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠
脱氢乙酸
食品添加剂是添加到食品中以保持风味或增强口感，改善外观或其他品质的物质。食品添加剂用途可以分为防腐剂、甜味剂、着色剂，增稠剂等。食品安全国家标准《食品添加剂使用标准GB 2760-2014》规定了不同食品中可以使用的食品添加剂的种类和限量，按照标准要求，使用添加剂对食品工业发展、食品安全、延长食品保质期有重要的作用，但是违规使用或超量使用添加剂就会给人体带来危害。目前测定食品添加剂的方法主要有气相色谱法，液相色谱法，气相色谱质谱连用法，液相色谱质谱连用法等。本文涉及的五种食品添加剂主要是运用高效液相色谱法，根据食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的测定（GB 5009.28-2016）、食品安全国家标准食品中脱氢乙酸的测定（GB 5009.121-2016）、饮料中乙酰磺胺酸钾的测定（GB/T 5009.140-2003），对于同一食品样品，需要多个标准，进行多次检验，效率较低，给基层工作者带来很大的工作难度。需建立一种简单、通用的方法，能同时测定多种食品添加剂。对比国标方法本法案具有，前处理步骤简单、回收率高、方法稳定性好、灵敏度和准确度高等优点。
1材料与方法：
1.1仪器设备
1、高效液相色谱仪（配二极管阵列检测器，Thermo scientific ultiMate 3000）2、KQ3200DE型数控超声波清洗器3、METTLER TOLEDO酸度计4、ELITIST 21K-R 高速冷冻离心机5、天津天马衡基万分之一的天平。
1.2材料与试剂
1、安赛蜜：浓度1.00mg/mL（中国计量科学研究院;2、苯甲酸：浓度1.00mg/mL（中国计量科学研究院;3、山梨酸：浓度1.00mg/mL（中国计量科学研究院4、糖精钠;浓度1.00mg/mL（中国计量科学研究院5、脱氢乙酸（Dehydroacetic Acid，25G，CAS：520-45-6）（纯度98%）6、甲醇：（色谱纯，美国Fisher公司7、氨水（优级纯）8、无水乙醇（分析纯）9、正己烷（分析纯）9、超纯水
（1）脫氢乙酸（98.0%）储备液。用10mL 20g/L的氢氧化钠溶液溶解，加水配置成1.00mg/mL的储备液。
（2）0.02mol/L乙酸铵溶液。称取1.54g优级纯的乙酸铵用水溶解后定容至1000mL，经0.22um滤膜过滤超声后备用。
（3）220g/L乙酸锌溶液，称取220g分析纯乙酸锌溶于少量水中，加入30mL冰乙酸，用水定容至1000mL.
（4）106g/L亚铁氰化钾溶液。称取106g亚铁氰化钾用水定容至1000mL.
（5）20g/L氢氧化钠溶液。称取20g分析纯氢氧化钠用水溶解后定容至1000mL.
（6）氨水溶液（1+99）.取氨水1mL，加99mL水中，混匀。
实验方案：
1.3试验方法
1.3.1色谱柱：（ACES C18Plus 250*4.6 SN：4F30809），流动相：甲醇：乙酸铵=5：95，总流速：1.00mL/min，柱压：69MPa，柱温：30℃，检测波长：230nm，进样体积：10uL，采集时间：25min.
1.3.2标准溶液的配制：
分别准确吸取安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸标准储备液（1000mg/L）各10mL于100mL容量瓶中，用水定容成混合标准中间溶液（100mg/L）.分别准确吸取混合标准储备液0.0、0.10、0.50、1.00、2.00、5.00、10.00于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，配制成质量浓度为：0.00、1.00、5.00、10.0、20.0、50.0、100mg/L，经0.22um水系滤头过滤后上机检测，绘制标准曲线。
样品前处理：
（1）液体样品：碳酸饮料、配制酒、酱油、醋等液体样品，称取混匀样品2-5g（精确至0.0001g），放入50mL的比色管中，用水定容至刻度，混匀，过0.22um微孔滤膜过滤，滤液待机分析，含蛋白较多的液体样品各加5mL的亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白。
（2）固体样品：含油脂较多的试样，精确称取2-5g试样于100mL比色管中，加10mL正己烷，于60水浴加热5min，轻摇以溶解脂肪，然后加氨水溶液（1+99）50mL，无水乙醇2mL，弃去有机相，水相转移至100mL比色管中。一般固体试样精确称取2-5g样品于100mL的比色管中，加入50mL的水，摇匀浸泡30min.分别在上述样液中各加5mL的亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白，最后定容、静置，取上层液经0.22um水系滤头过滤后上机。采用外标准与标准曲线比较定量。待测样液待测组分浓度应在标准曲线范围内，超出曲线应将样液稀释后再进行分析。
结果计算：样中待测组分含量的计算公式如（1）所示。
式（1）中，X为试样中待测组分含量，g/kg。
c为由标准曲线得出的试样中待测物的质量浓度，mg/L.
v为试样定容体积，mL.
1000为mg/kg转换为g/kg的换算因子。
2 实验结果与分析： 2.1波长选择
实验中对安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸5种添加剂进行波长扫描，发现最大吸收波长分别在：225.4nm、219.2nm、228.7nm、255.0nm、310.8nm处（其中脱氢乙酸的最大吸收波长310.8nm处有干扰，而次级波长为230.2nm），综合考虑各组分的灵敏度，本实验选择的波长为230nm.
2.2流动相选择
如果选乙腈和0.02mol/L乙酸铵水溶液为流动相时，由于乙腈洗脱能力强，还没分离就被冲了下来。无法达到分离效果。如果提高甲醇比例，会使糖精钠和脱氢乙酸叠加在一起。实验中采用甲醇与0.02mol/L乙酸铵水溶液做流动相，流速为1.0mL/min.甲醇与乙酸氨水溶液流动相比例为5：95时，分离效果最好。
2.3 线性回归方程、检出限和回收率
将配制好的标准曲线上机分析，得到每种物质线性方程，在线性范围内较好，相关系数R均大于0.998，以3倍噪声为检出限，以饮料为代表样品，添加低水平的5种混标，每个水平重复测定6次，计算平均回收率和精密度，结果见表1。5种添加剂的加标回收率为96.4%-98.5%，相对标准偏差为1.02%-1.89%。
3 结论：
本文建立一种同时测定食品中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸5种食品添加剂的液相色譜法，解决了国家标准不能同时检测的弊端，适用范围基本上覆盖了所有食品类别，通过二极管检测器对定性结果做了进一步论证，提高了检测结果的准确性，该方法耗时短，操作简单，适用于样品的快速检验，可作为国家标准的补充进行推广。
参考文献：
[1]中华人民共和国卫生部GB 2760-2014 食品安全国家标准食品添加剂使用标准[S]。北京：中国标准出版社，2014。
[2]中华人民共和国卫生部GB/T 5009.28-2016食品中苯甲酸，山梨酸和糖精钠的测定[S]。北京：中国标准出版社，2016。
[3]中华人民共和国卫生部GB/T 5009.121-2016食品中脱氢乙酸的测定[S]。北京中国标准出版社，2016。
[4]中华人民共和国卫生部GB/T 5009.1402003饮料中乙酰磺胺酸钾的测定[S]。北京中国标准出版社，2003。
[5]方小丽，超高液相色谱法同时测定饮料中食品添加剂[J]，食品工业，2018，39（12）：314-318
[6]苏建国，彭进.UPLC同时测定风味饮料中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸方法研究[J]。中国食品添加剂，2011，22（2）：243-245.
[7]张春玲.高效液相色谱法同时测定食品中的苯甲酸、山梨酸、糖精钠[J]，中国卫生检验杂志，2007，17（5）：936-937.
作者简介：
刘晓霞（1981年-），女，山西临汾人，临汾市综合检验检测中心工程师，大学本科。