【摘 要】
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目的建立扩增、纯化和生物活性鉴定重组腺病毒AxCA-BDNF的有效方法,为进一步研究应用腺病毒介导的BDNF进行神经系统疾病的基因治疗奠定基础。方法应用人胚肾293细胞作为包装
【机 构】
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北京军区总医院神经外科,第三军医大学大坪医院野战外科研究所
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目的建立扩增、纯化和生物活性鉴定重组腺病毒AxCA-BDNF的有效方法,为进一步研究应用腺病毒介导的BDNF进行神经系统疾病的基因治疗奠定基础。方法应用人胚肾293细胞作为包装细胞,扩增携带BDNF cDNA表达片段的重组腺病毒载体AxCA-BDNF;利用改良的CsCl超速离心法对其进行纯化;应用病毒空斑试验,对纯化病毒液进行病毒生物活性测定。结果获得了50 μl纯化病毒液;病毒滴度达2.2×108~1.8×1010 pfu/ml。结论通过培养扩增293细胞,可成功扩增重组腺病毒AxCA-BDNF;纯化病毒液量可完全满足体内基因转染实验的需要;病毒空斑实验证明其具有高强度的生物活性。
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