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摘 要：目的：运用HPLC法测定法对不同产地药材陈皮中橙皮苷含量进行测量。方法：应用Discovery C18色谱柱，使用的流动相为甲醇、冰醋酸、水，彼此之间的比例为35：5：60，通过检测最适宜的波长为283nm，最适宜的流速应该是1.0ml/min。结果：橙皮苷处于21.43-2143μg/ml之间时，拥有比较好的线性关系，平均回收率也非常高，达到了98.78%，结果表明，药材陈皮产地不同，橙皮苷含量也有一定的区别。结论：运用PLC法来对不同产地药材陈皮中橙皮苷含量测量具有非常突出的优势，简单快捷，具有非常好的准确性，而且重复性也非常好，值得推广应用。
关键词：HPLC法；陈皮；橙皮苷；运用
我国多地都有种植陈皮，比如福建、广东等地。陈皮是一味中草药，主要功能有理气健脾、燥湿化痰等，主要用来治疗食少吐泻、胸闷等疾病。陈皮中最重要的成分就是橙皮苷。很多研究者应用紫外分光光度法对陈皮中的橙皮苷进行检测，效果不佳，尤其表现在专属性差。有报道称，运用HPLC法测定陈皮中橙皮苷含量测量具有非常好的效果。为此本文采用HPLC法，对来自于6种不同产地的陈皮中的橙皮苷进行测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器
美国，Discovery，C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），美国Water717，高效液相色谱仪器，紫外检测器为，SPD-10Avp，美国梅特勒-托利多，AL204，分析天平（精确度，0.0001g），郑州宏朗DZKW-D-6，型电热恒温水浴锅，济宁万和，Model，C9860A，超声波清洗脱气机器，河北，DZF-6021，型真空干燥箱。
1.2 试剂：甲醇溶液为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为三蒸水。
1.3 试药：橙皮苷对照组（购于中国药品生物制品检定所，批号：130825-200921），6，批不同产地陈皮药材均购于各地方的药材公司，经我当地药品检验所鉴定均为正品。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
应用Discovery C18色谱柱，将甲醇：冰醋酸：水=35：5：60，作为流动相，检测波长确定为283nm，流速确定为1.0mL/min，色谱柱温度确定为25上℃，进样量确定为20ΜL。
2.2 溶液制备
2.2.1 制备对照品溶液。运用天平称取5mg橙皮苷，该对照品必须要经过P2O5，再通过室温减压，而后再进行干燥24h才可使用，将对照品放入到25μL容量瓶中，而后添加甲醇溶液，待到指定刻度后，摇晃均匀，静置一段时间后，即得到对照品溶液。选择应用精密仪器称取对照品溶液，共5μL，而后将流动相溶液放入到25μL容量瓶中，摇晃均匀，静置一段时间后，过0.22μm滤膜，而后将其放到冰箱中，冰箱温度为-20℃，储备起来以待日后应用。
2.2.2 制备供试品溶液。将来自于福建、广东、四川、广西、浙江、湖南等六地的药材陈皮分别放入到粉碎机中，待到粉碎结束后，再将其放入到电热恒温干燥箱中，箱中温度要达到55℃，干燥时间为6h。应用相关仪器精密称取各个产地陈皮粉碎品各2g，而后加入160μL石油醚溶液，使用超声仪器超声45min，将所有的石油醚过滤出来。待到药渣挥干后，再加入到不同容量的甲醇溶液中，分别为60μL、60μL、40μL，再进行超声提取，共3次，每次45min。完成过滤后，研究者需要将过滤液合并，待到甲醇溶液达到指定要求的200μL时，摇晃均匀，应用微孔滤膜进行过滤，最后得到了供试品溶液，将其放到冰箱中备用，冰箱温度调到-20℃。
2.3 系统适应性研究
2.3.1 研究者需要根据制备供试品溶液的步骤进行制备阴性对照液制备。
2.3.2 系统适应性。依据上述要求的色谱条件，研究将上述三种溶液进行精确提取，每个溶液各20μL。，供试品中橙皮苷与相邻杂质分离度>1.5，阴性对照溶液与橙皮苷对照品相同保留时间处未见色谱峰，认为不干扰实验测定结果。理论塔板数按照橙皮苷峰计算不低于，3000。
2.4 线性关系考察
按照对照品溶液，精密吸取对照品，溶，液，1.0μl、2.0μl、4.0μl、6.0μl、8.0μl、10.0μl、12.0μl、14.0μl、16.0μl、20.0μl，进样量为，20.0μl，不足，20μl，体积均采用流动相溶液进行补充，分别注入高效液相色谱仪器中，按照色谱条件进行测定，记录峰面积，以峰面积作为纵坐标（Y），橙皮苷进样浓度作为横坐标（X），绘制线性关系方程，得线性回归方程为：Y=1.8069×106X+1.8056×104，（r，=0.9996），，橙，皮，苷，在21.43～2143μg/μl，范围内呈良好的线性关系（这个应该没办法加入到论文中解释，根据方程可以得到一条直线，根据论文研究的需要进行橙皮苷浓度的选择，也可以选择其他浓度范围，只要是满足线性关系方程即可）。
2.5 精密度实验
精密量取橙皮苷对照品溶液20μl，连续进样，5次，按照线性关系方程计算峰面积，RSD=0.39%，表明仪器的精密度良好。
2.6 稳定性实验
精密量取供试品溶液20μl，在色谱条件下，在，0h、1h、2h、4h、6h、8h、12h，内各进样，1，次测定峰面积，峰面积，RSD=1.18%，表明供试品溶液在，12h，内稳定性较好。
2.7 重复性实验
精密称取同一产地陈皮药材粗粉，5，份，按照供试品溶液的配置方法制备供品溶液，按照色谱条件下进行含量测定，橙皮苷的平均含量为4.28%，RSD=2.15%，表明测定方法的重复性较好。
2.8 加样回收率实验
精密量取，1.0μl、1.0μl、1.5μl、1.5μl、2.0μl、2.0μl，橙皮苷对照品溶液（含量约为，5.237mg/μl），置于，10μl，容量瓶中，取，6，份已知含量的供试品溶液加入不同浓度容量瓶中溶解，采用甲醇溶液稀释至刻度，分别取，20.0μl，注入高效液相色谱仪器中，按照色谱条件测定橙皮苷峰面积，计算平均回收率为98.7%。
3 讨论
3.1 選择适宜的流动相。研究过程中，研究者选择应用了甲醇、冰醋酸、水，各自比例分别为45：5：50；35：5：60，再选择一种甲醇、0.2%三氟乙酸溶液，比例为65：35。研究者从这三种流动相中选择最适宜的一种作为本试验的流动相。其中甲醇：冰醋酸：水=45：5：50，甲醇：0.2%三氟乙酸溶液等于65：35，这两种流动相样品分离效果不佳，而甲醇：冰醋酸：水=35：5：60能够将样品中的橙皮苷进行很好的分离，所以研究者选择此种流动相。
3.2 很多文献报道都采用甲醇溶液作为提取溶剂来提取橙皮苷，而橙皮苷在溶液中提取含量却非常低，为此，研究者选择其他提取溶剂，即石油醚溶液。实验表明此种提取溶剂与甲醇溶液与相比，提取效果都要好，与此同时选择应用超声仪器进行超声提取。
此次研究中选取了6个产地的陈皮，通过HPLC法测定发现，广东产地的陈皮中橙皮苷含量最高，达到了5.84%，为广西产地的橙皮苷含量最低，为3.92%。各个产地的药物陈皮橙皮苷含量都不相同，差异性明显。研究发现，HPLC法测量不同产地药材陈皮中的橙皮苷效果非常好，而且具有一定的专属性，整体操作步骤也比较简单。
参考文献
[1]苏家辉，林炳国，吴声振，张春盛.高效液相色谱法测定中药陈皮中橙皮苷的含量[J].中医临床研究，2014（12）.
[2]周威，郁颖佳，谢美芬，李晓雯，李嫣，段更利.微波辅助萃取-高效液相色谱法测定陈皮中橙皮苷含量[J].医药导报，2011（5）.
[3]张成川，赵颖飞，戚杏珠.高效液相色谱法测定乐清地产陈皮中橙皮苷的含量[J].海峡药学，2010（11）.
[4]孙冬梅，毕晓黎，胥爱丽，庄玉坚.高效液相色谱法测定不同产地陈皮中辛弗林的含量[J].今日药学，2009（8）.
关键词：HPLC法；陈皮；橙皮苷；运用
我国多地都有种植陈皮，比如福建、广东等地。陈皮是一味中草药，主要功能有理气健脾、燥湿化痰等，主要用来治疗食少吐泻、胸闷等疾病。陈皮中最重要的成分就是橙皮苷。很多研究者应用紫外分光光度法对陈皮中的橙皮苷进行检测，效果不佳，尤其表现在专属性差。有报道称，运用HPLC法测定陈皮中橙皮苷含量测量具有非常好的效果。为此本文采用HPLC法，对来自于6种不同产地的陈皮中的橙皮苷进行测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器
美国，Discovery，C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），美国Water717，高效液相色谱仪器，紫外检测器为，SPD-10Avp，美国梅特勒-托利多，AL204，分析天平（精确度，0.0001g），郑州宏朗DZKW-D-6，型电热恒温水浴锅，济宁万和，Model，C9860A，超声波清洗脱气机器，河北，DZF-6021，型真空干燥箱。
1.2 试剂：甲醇溶液为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为三蒸水。
1.3 试药：橙皮苷对照组（购于中国药品生物制品检定所，批号：130825-200921），6，批不同产地陈皮药材均购于各地方的药材公司，经我当地药品检验所鉴定均为正品。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
应用Discovery C18色谱柱，将甲醇：冰醋酸：水=35：5：60，作为流动相，检测波长确定为283nm，流速确定为1.0mL/min，色谱柱温度确定为25上℃，进样量确定为20ΜL。
2.2 溶液制备
2.2.1 制备对照品溶液。运用天平称取5mg橙皮苷，该对照品必须要经过P2O5，再通过室温减压，而后再进行干燥24h才可使用，将对照品放入到25μL容量瓶中，而后添加甲醇溶液，待到指定刻度后，摇晃均匀，静置一段时间后，即得到对照品溶液。选择应用精密仪器称取对照品溶液，共5μL，而后将流动相溶液放入到25μL容量瓶中，摇晃均匀，静置一段时间后，过0.22μm滤膜，而后将其放到冰箱中，冰箱温度为-20℃，储备起来以待日后应用。
2.2.2 制备供试品溶液。将来自于福建、广东、四川、广西、浙江、湖南等六地的药材陈皮分别放入到粉碎机中，待到粉碎结束后，再将其放入到电热恒温干燥箱中，箱中温度要达到55℃，干燥时间为6h。应用相关仪器精密称取各个产地陈皮粉碎品各2g，而后加入160μL石油醚溶液，使用超声仪器超声45min，将所有的石油醚过滤出来。待到药渣挥干后，再加入到不同容量的甲醇溶液中，分别为60μL、60μL、40μL，再进行超声提取，共3次，每次45min。完成过滤后，研究者需要将过滤液合并，待到甲醇溶液达到指定要求的200μL时，摇晃均匀，应用微孔滤膜进行过滤，最后得到了供试品溶液，将其放到冰箱中备用，冰箱温度调到-20℃。
2.3 系统适应性研究
2.3.1 研究者需要根据制备供试品溶液的步骤进行制备阴性对照液制备。
2.3.2 系统适应性。依据上述要求的色谱条件，研究将上述三种溶液进行精确提取，每个溶液各20μL。，供试品中橙皮苷与相邻杂质分离度>1.5，阴性对照溶液与橙皮苷对照品相同保留时间处未见色谱峰，认为不干扰实验测定结果。理论塔板数按照橙皮苷峰计算不低于，3000。
2.4 线性关系考察
按照对照品溶液，精密吸取对照品，溶，液，1.0μl、2.0μl、4.0μl、6.0μl、8.0μl、10.0μl、12.0μl、14.0μl、16.0μl、20.0μl，进样量为，20.0μl，不足，20μl，体积均采用流动相溶液进行补充，分别注入高效液相色谱仪器中，按照色谱条件进行测定，记录峰面积，以峰面积作为纵坐标（Y），橙皮苷进样浓度作为横坐标（X），绘制线性关系方程，得线性回归方程为：Y=1.8069×106X+1.8056×104，（r，=0.9996），，橙，皮，苷，在21.43～2143μg/μl，范围内呈良好的线性关系（这个应该没办法加入到论文中解释，根据方程可以得到一条直线，根据论文研究的需要进行橙皮苷浓度的选择，也可以选择其他浓度范围，只要是满足线性关系方程即可）。
2.5 精密度实验
精密量取橙皮苷对照品溶液20μl，连续进样，5次，按照线性关系方程计算峰面积，RSD=0.39%，表明仪器的精密度良好。
2.6 稳定性实验
精密量取供试品溶液20μl，在色谱条件下，在，0h、1h、2h、4h、6h、8h、12h，内各进样，1，次测定峰面积，峰面积，RSD=1.18%，表明供试品溶液在，12h，内稳定性较好。
2.7 重复性实验
精密称取同一产地陈皮药材粗粉，5，份，按照供试品溶液的配置方法制备供品溶液，按照色谱条件下进行含量测定，橙皮苷的平均含量为4.28%，RSD=2.15%，表明测定方法的重复性较好。
2.8 加样回收率实验
精密量取，1.0μl、1.0μl、1.5μl、1.5μl、2.0μl、2.0μl，橙皮苷对照品溶液（含量约为，5.237mg/μl），置于，10μl，容量瓶中，取，6，份已知含量的供试品溶液加入不同浓度容量瓶中溶解，采用甲醇溶液稀释至刻度，分别取，20.0μl，注入高效液相色谱仪器中，按照色谱条件测定橙皮苷峰面积，计算平均回收率为98.7%。
3 讨论
3.1 選择适宜的流动相。研究过程中，研究者选择应用了甲醇、冰醋酸、水，各自比例分别为45：5：50；35：5：60，再选择一种甲醇、0.2%三氟乙酸溶液，比例为65：35。研究者从这三种流动相中选择最适宜的一种作为本试验的流动相。其中甲醇：冰醋酸：水=45：5：50，甲醇：0.2%三氟乙酸溶液等于65：35，这两种流动相样品分离效果不佳，而甲醇：冰醋酸：水=35：5：60能够将样品中的橙皮苷进行很好的分离，所以研究者选择此种流动相。
3.2 很多文献报道都采用甲醇溶液作为提取溶剂来提取橙皮苷，而橙皮苷在溶液中提取含量却非常低，为此，研究者选择其他提取溶剂，即石油醚溶液。实验表明此种提取溶剂与甲醇溶液与相比，提取效果都要好，与此同时选择应用超声仪器进行超声提取。
此次研究中选取了6个产地的陈皮，通过HPLC法测定发现，广东产地的陈皮中橙皮苷含量最高，达到了5.84%，为广西产地的橙皮苷含量最低，为3.92%。各个产地的药物陈皮橙皮苷含量都不相同，差异性明显。研究发现，HPLC法测量不同产地药材陈皮中的橙皮苷效果非常好，而且具有一定的专属性，整体操作步骤也比较简单。
参考文献
[1]苏家辉，林炳国，吴声振，张春盛.高效液相色谱法测定中药陈皮中橙皮苷的含量[J].中医临床研究，2014（12）.
[2]周威，郁颖佳，谢美芬，李晓雯，李嫣，段更利.微波辅助萃取-高效液相色谱法测定陈皮中橙皮苷含量[J].医药导报，2011（5）.
[3]张成川，赵颖飞，戚杏珠.高效液相色谱法测定乐清地产陈皮中橙皮苷的含量[J].海峡药学，2010（11）.
[4]孙冬梅，毕晓黎，胥爱丽，庄玉坚.高效液相色谱法测定不同产地陈皮中辛弗林的含量[J].今日药学，2009（8）.