【摘 要】
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目的 研究短发夹RNA(shRNA)沉默STAT3基因表达对人恶性黑素瘤细胞A375增殖和凋亡的作用.方法 设计和构建靶向STAT3基因有小发夹结构的正义和反义寡核苷酸,退火后克隆入psiRNA
【机 构】
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河南省人民医院皮肤科,华中科技大学同济医学院附属协和医院皮肤科
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目的 研究短发夹RNA(shRNA)沉默STAT3基因表达对人恶性黑素瘤细胞A375增殖和凋亡的作用.方法 设计和构建靶向STAT3基因有小发夹结构的正义和反义寡核苷酸,退火后克隆入psiRNA-hHlneo质粒,使用脂质体转染A375.实验分为对照组、空载体组和STAT3转染组.通过RT-PCR和Western印迹检测A375细胞中STAT3基因mRNA和蛋白表达水平,MTT比色法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪分析细胞周期分布,观察细胞凋亡.结果 STAT3转染组A375细胞STAT3 mRNA和蛋白表达水平(分别为0.2136±0.0626、0.8214±0.0430)明显低于对照组(0.7826±0.0701、3.1693±0.0846)和空载体组(0.8518±0.0783、3.2180±0.0780),P值均＜0.01.STAT3转染24、48、72 h组的细胞增殖抑制率明显增高(分别为21.35％±2.12％、32.52％±2.64％、40.40％±3.08％),与正常对照组(1.39％±0.53％、3.05％±1.16％、4.41％±1.42％)、空载体组(2.63％±1.38％、5.84％±2.47％、10.32％±2.48％)比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).流式细胞仪检测显示,STAT3转染组细胞的凋亡率(81.06％±2.10％)较对照组(26.28％±0.47％)和空载体组(27.31％±1.05％)明显增高,差异有统计学意义(P＜0.01).细胞周期分析显示,STAT3转染组G0/G1期细胞比例(68.43％±4.00％)增高,S期细胞比例(17.40％±2.05％)降低,与对照组(分别为60.07％±2.47％、28.40％±2.09％)及空载体组(分别为60.29％±2.26％、27.34％±3.63％)相比,差异有统计学意义(P＜0.01或＜0.05).结论 针对STAT3基因的特异性小RNA干扰质粒能够下调STAT3基因和蛋白表达,抑制A375的增殖能力,诱导细胞凋亡.
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