【摘 要】
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亚硝基谷胱甘肽还原酶（S-nitrosoglutathione reductase,GSNOR）在生物体中调控信号分子一氧化氮（NO）的代谢和平衡。为了深入研究GSNOR的功能,利用RT-PCR和RACE（Rapid-amplificatio
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31101557;31460526)
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亚硝基谷胱甘肽还原酶（S-nitrosoglutathione reductase,GSNOR）在生物体中调控信号分子一氧化氮（NO）的代谢和平衡。为了深入研究GSNOR的功能,利用RT-PCR和RACE（Rapid-amplification of cDNA ends）技术从菠菜根中克隆了SoGSNOR基因的全长序列,该基因编码框1 140 bp,编码379个氨基酸,GenBank登录号为KR381778。将其克隆到原核表达载体pET32a上,构建原核表达载体pET32a-SoGSNOR,并转化大肠杆菌BL21 star（DE3）,通过IPTG诱导重组SoGSNOR在大肠杆菌BL21 star（DE3）中高效表达,表达的融合蛋白分子质量约为65 ku,且在上清液和包涵体中均有表达,可溶性部分经Ni2+NTA亲和柱纯化,获得纯化蛋白,并注射昆明小鼠,制备多克隆抗体,并对其进行了Western Blot检测,结果表明,稀释10 000倍的抗血清能够检测到与预期SoGSNOR大小一致的目的条带。试验结果为进一步研究菠菜SoGSNOR基因功能奠定了基础。
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