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【摘 要】 目的对十二味系列化妆品皮肤刺激性和致敏性进行动物试验观察。方法以家兔为模型进行多次给药皮肤刺激试验,以豚鼠为模型进行皮肤致敏作用试验。结果十二味系列化妆品对家兔皮肤未见任何刺激作用,也不引起豚鼠出现过敏反应。结论十二味系列化妆品是一类安全性较好的化妆品。
【关键词】 十二味系列化妆品 刺激性 过敏性
【中图分类号】 R965.3 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-5160(2014)04-0294-02
中药化妆品的历史可追溯到二千年前,如《神农本草经》载有“白芷,长肌肤润泽,可作面脂。”历代中医书籍中,中药化妆品常单列章节,如《外台秘要》在卷第32中,专设“面部面脂药头膏发鬓衣香澡豆等34门”;《普济方》在第52卷设有“泽面”、“面膏”、“澡豆”等节,在第268卷设有“制脂粉法”1节。隋代还曾出现中药化妆品专著《妆台方》。据有关专家统计,历代的美容配方多达两千余个。
十二味系列化妆品是以中医药理论为指导,并根据各种中药材的不同特性开发多种剂型的系列化妆品,包括三七活肤、滇竹祛痘、丹参无暇、雪茯苓美白、甘草舒缓等系列。我们依照化妆品卫生规范(2007年版)[1]的要求,对十二味系列化妆品中的多个品种进行了皮肤刺激和致敏试验,为这类产品的安全性提供试验依据。
1 试验材料
1.1 供试品
十二味甘草舒缓按摩乳,十二味雪茯苓美白日霜,十二味雪茯苓美白晚霜,十二味三七活肤面乳,本公司實验室生产。
1.2 试验动物
新西兰大耳白兔(1.8~2.3kg),普通级豚鼠(250g~300g),由昆明医学院实验动物中心提供。
2 试验方法
2.1 动物分组
2.1.1 将新西兰大耳白兔随机分为四组,分别为十二味甘草舒缓按摩乳、十二味雪茯苓美白日霜、十二味雪茯苓美白晚霜、十二味三七活肤面乳组,每组动物4只,雌、雄各2只。
2.1.2 将豚鼠随机分为六组,受试物每组20只,阴性和阳性对照组每组10只。分别为十二味甘草舒缓按摩乳组、十二味雪茯苓美白日霜组、十二味雪茯苓美白晚霜组、十二味三七活肤面乳组、阴性对照组和阳性对照组。
2.2 皮肤刺激性试验[1,2,3]
2.2.1 试验前24h采用电动剃头器及脱毛剂(5%硫化钠)将家兔脊柱两侧去毛,去毛区面积约为3cm×3cm,24h后选择皮肤健康完整无损的动物进行试验,涂抹面积2.5cm×2.5cm。试验采用同体左右自身对比,左侧去毛区涂抹受试物0.5g(ml),右侧去毛区涂以等量赋形剂,然后用二层纱布(2.5cm×2.5cm)和一层玻璃纸覆盖,再用无刺激性胶布和绷带加以固定。贴敷时间4小时,贴敷结束后,除去受试物并用温水清洁给药部位。每日涂抹受试物一次,连续涂抹14天,从第二天开始,每次涂抹前剪毛。
2.2.2 疗效评价在每次去除受试物1小时后观察涂抹部位皮肤反应。按卫生部《化妆品卫生规范》2007年版皮肤刺激反应评分标准进行评分,计算每天每只动物平均积分,按皮肤刺激强度分级标准判定皮肤刺激强度。
2.3 皮肤过敏性试验[1,2,4]
采用局部封闭涂皮法(BuehlerTest,BT)进行皮肤致敏性试验。
2.3.1 诱导接触于给受试物前24小时将动物背部脊柱左侧毛脱掉,脱毛范围3cm×3cm。实验第零天取受试物0.2g涂在受试豚鼠左侧脱毛区,用2层纱布和1层玻璃纸覆盖,再以无刺激胶布封闭固定,持续6h。第7和第14天以同样方法各重复1次。阴性对照组不予诱导接触,阳性对照组左侧脱毛区给予阳性对照物0.2g(1%的2,4-二硝基氯代苯),接触方法同上。
2.3.2 激发接触于第28天激发接触,采用与诱导接触相同的方法处理豚鼠右侧脱毛区,6h后去掉受试物。阴性对照组右侧脱毛区给予0.2g受试物,阳性对照组右侧脱毛区给予阳性对照物0.2g(0.1%的2,4-二硝基氯代苯),激发接触方法皆同上。
2.3.3 评价指标激发接触后24小时、48小时观察皮肤红斑、水肿和其他异常反应情况,按卫生部《化妆品卫生规范》2007年版变态反应试验皮肤反应评分标准评分,当受试物组动物出现皮肤反应积分≥2时,判为该动物出现皮肤变态反应阳性;按致敏强度标准判定受试物的致敏强度,并计算致敏率(致敏率:皮肤红斑或水肿的动物数/受试物总数)。
3 结果
多次给药皮肤刺激试验结果显示,十二味系列化妆品及赋形剂多次涂抹于家兔完整皮肤及停药72h内,除十二味甘草舒缓按摩乳组有一只家兔第3、4天给药后左边(涂化妆品)出现轻度红斑,次日涂药前观察已消失;另一只家兔第3天给药后右边(涂基质)出现轻度红斑,次日涂药前观察消失;其余各组均未发现涂药部位有红斑、水肿、出血点、色素沉着以及皮肤粗糙或皮肤菲薄等现象。受试物及赋形剂皮肤刺激反应的积分均值均小于0.5,皮肤刺激性强度评价均为无刺激性。(结果见表1)
皮肤过敏性试验结果显示,阳性药组动物皮肤受试区自激发给药6h后出现明显红斑,24小时红斑依然明显,48小时渐消退,72小时后部分动物可见红斑,致敏率为100%。其余各组动物皮肤受试区自激发给药6至72h未出现异常反应,由此可见受试样品不产生致敏作用。(结果见表2)
4 讨论
化妆品是每天使用于皮肤上的产品,因此它的安全性是最重要的问题。十二味系列化妆品主要利用三七中提取的三七总皂苷、三七多糖、三七氨基酸,以及川芎、侧柏、苦参、薏苡仁等中药经科学组方、提取有效成份后制成的中药系列化妆品,该系列化妆品于2008年获得“中国化妆品行业十大影响力品牌”称号。因受条件所限,本试验仅采用了十二味系列化妆品中的4个产品进行试验,4个产品对家兔14天多次皮肤刺激试验结果为无刺激性;对豚鼠无皮肤致敏性,属于安全的化妆品。在后续的研究中我们将加大样本量,在更广泛的范围内对该系列化妆品的安全性进行研究,为其应用提供试验依据。
参考文献
[1]卫生部监督局,化妆品卫生规范[s].2007。
[2]谢荣增,仝宝生等;苦豆豆抑菌洁面液皮肤刺激和皮肤过敏实验研究[J];中国中医药咨讯;2011;3(22):3-4
[3]廖秀萍,田辉,张敏等;羊胎素保湿润肤霜皮肤刺激性实验研究[J];湖北中医杂志;2011;33(12):76
[4]张子伯,刘巍,任京杰等;一种天然化妆品对豚鼠的皮肤致敏性试验[J];毒理学杂志;2OO6;20(3):197-198
作者简介:黄元丽(1975~),女,汉族,工程师、执业药师;长期从事新药药理及相关研究。
【关键词】 十二味系列化妆品 刺激性 过敏性
【中图分类号】 R965.3 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-5160(2014)04-0294-02
中药化妆品的历史可追溯到二千年前,如《神农本草经》载有“白芷,长肌肤润泽,可作面脂。”历代中医书籍中,中药化妆品常单列章节,如《外台秘要》在卷第32中,专设“面部面脂药头膏发鬓衣香澡豆等34门”;《普济方》在第52卷设有“泽面”、“面膏”、“澡豆”等节,在第268卷设有“制脂粉法”1节。隋代还曾出现中药化妆品专著《妆台方》。据有关专家统计,历代的美容配方多达两千余个。
十二味系列化妆品是以中医药理论为指导,并根据各种中药材的不同特性开发多种剂型的系列化妆品,包括三七活肤、滇竹祛痘、丹参无暇、雪茯苓美白、甘草舒缓等系列。我们依照化妆品卫生规范(2007年版)[1]的要求,对十二味系列化妆品中的多个品种进行了皮肤刺激和致敏试验,为这类产品的安全性提供试验依据。
1 试验材料
1.1 供试品
十二味甘草舒缓按摩乳,十二味雪茯苓美白日霜,十二味雪茯苓美白晚霜,十二味三七活肤面乳,本公司實验室生产。
1.2 试验动物
新西兰大耳白兔(1.8~2.3kg),普通级豚鼠(250g~300g),由昆明医学院实验动物中心提供。
2 试验方法
2.1 动物分组
2.1.1 将新西兰大耳白兔随机分为四组,分别为十二味甘草舒缓按摩乳、十二味雪茯苓美白日霜、十二味雪茯苓美白晚霜、十二味三七活肤面乳组,每组动物4只,雌、雄各2只。
2.1.2 将豚鼠随机分为六组,受试物每组20只,阴性和阳性对照组每组10只。分别为十二味甘草舒缓按摩乳组、十二味雪茯苓美白日霜组、十二味雪茯苓美白晚霜组、十二味三七活肤面乳组、阴性对照组和阳性对照组。
2.2 皮肤刺激性试验[1,2,3]
2.2.1 试验前24h采用电动剃头器及脱毛剂(5%硫化钠)将家兔脊柱两侧去毛,去毛区面积约为3cm×3cm,24h后选择皮肤健康完整无损的动物进行试验,涂抹面积2.5cm×2.5cm。试验采用同体左右自身对比,左侧去毛区涂抹受试物0.5g(ml),右侧去毛区涂以等量赋形剂,然后用二层纱布(2.5cm×2.5cm)和一层玻璃纸覆盖,再用无刺激性胶布和绷带加以固定。贴敷时间4小时,贴敷结束后,除去受试物并用温水清洁给药部位。每日涂抹受试物一次,连续涂抹14天,从第二天开始,每次涂抹前剪毛。
2.2.2 疗效评价在每次去除受试物1小时后观察涂抹部位皮肤反应。按卫生部《化妆品卫生规范》2007年版皮肤刺激反应评分标准进行评分,计算每天每只动物平均积分,按皮肤刺激强度分级标准判定皮肤刺激强度。
2.3 皮肤过敏性试验[1,2,4]
采用局部封闭涂皮法(BuehlerTest,BT)进行皮肤致敏性试验。
2.3.1 诱导接触于给受试物前24小时将动物背部脊柱左侧毛脱掉,脱毛范围3cm×3cm。实验第零天取受试物0.2g涂在受试豚鼠左侧脱毛区,用2层纱布和1层玻璃纸覆盖,再以无刺激胶布封闭固定,持续6h。第7和第14天以同样方法各重复1次。阴性对照组不予诱导接触,阳性对照组左侧脱毛区给予阳性对照物0.2g(1%的2,4-二硝基氯代苯),接触方法同上。
2.3.2 激发接触于第28天激发接触,采用与诱导接触相同的方法处理豚鼠右侧脱毛区,6h后去掉受试物。阴性对照组右侧脱毛区给予0.2g受试物,阳性对照组右侧脱毛区给予阳性对照物0.2g(0.1%的2,4-二硝基氯代苯),激发接触方法皆同上。
2.3.3 评价指标激发接触后24小时、48小时观察皮肤红斑、水肿和其他异常反应情况,按卫生部《化妆品卫生规范》2007年版变态反应试验皮肤反应评分标准评分,当受试物组动物出现皮肤反应积分≥2时,判为该动物出现皮肤变态反应阳性;按致敏强度标准判定受试物的致敏强度,并计算致敏率(致敏率:皮肤红斑或水肿的动物数/受试物总数)。
3 结果
多次给药皮肤刺激试验结果显示,十二味系列化妆品及赋形剂多次涂抹于家兔完整皮肤及停药72h内,除十二味甘草舒缓按摩乳组有一只家兔第3、4天给药后左边(涂化妆品)出现轻度红斑,次日涂药前观察已消失;另一只家兔第3天给药后右边(涂基质)出现轻度红斑,次日涂药前观察消失;其余各组均未发现涂药部位有红斑、水肿、出血点、色素沉着以及皮肤粗糙或皮肤菲薄等现象。受试物及赋形剂皮肤刺激反应的积分均值均小于0.5,皮肤刺激性强度评价均为无刺激性。(结果见表1)
皮肤过敏性试验结果显示,阳性药组动物皮肤受试区自激发给药6h后出现明显红斑,24小时红斑依然明显,48小时渐消退,72小时后部分动物可见红斑,致敏率为100%。其余各组动物皮肤受试区自激发给药6至72h未出现异常反应,由此可见受试样品不产生致敏作用。(结果见表2)
4 讨论
化妆品是每天使用于皮肤上的产品,因此它的安全性是最重要的问题。十二味系列化妆品主要利用三七中提取的三七总皂苷、三七多糖、三七氨基酸,以及川芎、侧柏、苦参、薏苡仁等中药经科学组方、提取有效成份后制成的中药系列化妆品,该系列化妆品于2008年获得“中国化妆品行业十大影响力品牌”称号。因受条件所限,本试验仅采用了十二味系列化妆品中的4个产品进行试验,4个产品对家兔14天多次皮肤刺激试验结果为无刺激性;对豚鼠无皮肤致敏性,属于安全的化妆品。在后续的研究中我们将加大样本量,在更广泛的范围内对该系列化妆品的安全性进行研究,为其应用提供试验依据。
参考文献
[1]卫生部监督局,化妆品卫生规范[s].2007。
[2]谢荣增,仝宝生等;苦豆豆抑菌洁面液皮肤刺激和皮肤过敏实验研究[J];中国中医药咨讯;2011;3(22):3-4
[3]廖秀萍,田辉,张敏等;羊胎素保湿润肤霜皮肤刺激性实验研究[J];湖北中医杂志;2011;33(12):76
[4]张子伯,刘巍,任京杰等;一种天然化妆品对豚鼠的皮肤致敏性试验[J];毒理学杂志;2OO6;20(3):197-198
作者简介:黄元丽(1975~),女,汉族,工程师、执业药师;长期从事新药药理及相关研究。