锯缘青蟹(Scylla serrata)呼肠孤病毒5个结构蛋白互作分析

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采用酵母双杂交系统,对青蟹呼肠孤病毒(Scylla serrata reovirus)5个结构蛋白(VP3,VP6,VP9,VP11,VP12)间的双向互作进行了分析。将5个结构蛋白对应的ORF分别亚克隆至诱饵载体p GBKT7和猎物载体p GADT7,成功构建了10个酵母双杂交重组载体。将重组诱饵载体或重组捕获载体转化至酵母菌Y2H Gold中进行自激活检测,结果显示5个结构蛋白均不能激活酵母菌报告基因HIS3的表达,表明5个病毒蛋白均不具有自激活活性。通过酵母双杂交实验,从5个结构蛋白25个可能性互作对中,共筛选出2个双向互作对(VP11&VP6,VP11&VP12)和3个自身互作对(VP3&VP3,VP11&VP11,VP12&VP12)。本研究是有关Ss RV结构蛋白互作的首次报道。 The two-way interaction among the five structural proteins (VP3, VP6, VP9, ​​VP11, VP12) of Scylla serrata reovirus was analyzed by yeast two-hybrid system. The five ORFs corresponding to the structural proteins were subcloned into the bait vector pGBKT7 and the prey vector pGADT7, respectively. Ten yeast two-hybrid recombinant vectors were successfully constructed. The recombinant bait vector or recombinant capture vector was transformed into yeast Y2H Gold for self-activation test. The results showed that none of the five structural proteins could activate the yeast reporter gene HIS3, indicating that none of the five viral proteins had self-activating activity. Through yeast two-hybrid assay, two bidirectional interaction pairs (VP11 & VP6, VP11 & VP12) and three self-interaction pairs (VP3 & VP3, VP11 & VP11, VP12 & VP12) were screened from 25 possible interaction pairs of five structural proteins. This study is the first report on the interaction of Ss RV structural proteins.
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