雄激素受体相关蛋白267-α酵母双杂交诱饵重组质粒的构建及转化

来源 :中华实验外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dulcimerqin
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目的构建和转化雄激素受体相关蛋白267-α(ARA267-α)的酵母诱饵重组质粒,为通过酵母双杂交研究ARA267-α的功能奠定基础.方法用PCR扩增ARA267-α全长cDNA中编码PWWP和PHD-SET蛋白结构域的两个基因片段;将基因片段与pGBKT7载体定向重组 ;用酶切和测序鉴定重组质粒;将核苷酸序列正确的重组质粒转化入AH109酵母菌株.结果成功构建pGBKT7-PWWP和pGBKT7-PHDSET重组质粒.分别转化有2种重组质粒和pGBKT7空载体的3种AH109酵母都能在SD/-Trp/ X-α-gal培养基中长成白色菌落,但都不能在SD/-His/-Trp/2.5mmol/L 3-AT/X-α-gal和 SD/-Ade/-Trp/X-α-gal培养基中生长,在SD/-Trp液中培养16h后,A600均值分别为0.8、0.9、0.9.这表明重组质粒表达的融合蛋白没有激活HIS3、ADE2和MEL1酵母报告基因表达的活性,也没有酵母毒性作用.结论构建的诱饵重组质粒可以用于下一阶段的cDNA文库筛选.

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