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目的
探讨机械生长因子(MGF)调控骨髓间充质干细胞(MSCs)迁移作用机制。
方法分离Sprauge-Dawley(SD)大鼠的MSCs，外源性给予不同浓度(0，1，10，25，50 μM)MGF干预，采用Western Blot方法检测细胞骨架相关蛋白RhoA及其下游p-MYPT和粘附斑激酶相关蛋白p-FAK、t-FAK表达，探讨MGF对MSCs细胞骨架张力和粘附斑的调节作用；然后通过肉毒素C3抑制RhoA活性，采用Western Blot方法检测p-MYPT、p-FAK及FAK蛋白表达，采用Transwell跨膜小室实验检测细胞迁移能力，采用免疫荧光检测MSCs细胞骨架及粘附斑形成情况。
结果MGF可明显促进MSCs RhoA激酶激活及其下游p-MYPT表达，且该效应具有浓度依赖性，以MGF浓度为50 μM时RhoA及p-MYPT表达尤为显著；p-FAK/t-FAK结果提示MGF可激活粘附斑激酶FAK，促进粘附斑形成；使用肉毒素C3抑制RhoA活性后发现FAK激活受到明显抑制；Transwell实验结果提示MGF可促进MSCs迁移，而经肉毒素C3干预后能明显抑制MSCs迁移；免疫荧光染色结果提示MGF可促进MSCs细胞骨架重排及粘附斑形成，而经肉毒素C3干预后可见细胞骨架破坏及粘附斑形成明显减少。
结论MGF通过控制RhoA-FAK信号轴介导细胞骨架及粘附斑形成，从而调控MSCs迁移。