【摘 要】
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目的探讨甾醇类药NSC67657诱导急性早幼粒细胞白血病HL-60细胞单核系分化时β连环蛋白(β-catenin)和T细胞因子4(TCF-4)抑制蛋白(ICAT)和Wnt信号通路相关mRNA和蛋白的表达。方法10 μmol/L NSC67657药物处理HL-60细胞5 d后,采用瑞氏染色、非特异酯酶染色分析细胞的分化方向,采用流式细胞术分析细胞的分化程度和细胞周期的分布情况,采用逆转录聚合酶链反应
【机 构】
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400016 重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室,528403 中山市人民医院检验医学中心,400016 重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室,400016 重庆医科
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目的探讨甾醇类药NSC67657诱导急性早幼粒细胞白血病HL-60细胞单核系分化时β连环蛋白(β-catenin)和T细胞因子4(TCF-4)抑制蛋白(ICAT)和Wnt信号通路相关mRNA和蛋白的表达。
方法10 μmol/L NSC67657药物处理HL-60细胞5 d后,采用瑞氏染色、非特异酯酶染色分析细胞的分化方向,采用流式细胞术分析细胞的分化程度和细胞周期的分布情况,采用逆转录聚合酶链反应和Western blot检测Wnt信号通路相关因子ICAT、β-catenin、TCF-4、Wnt信号通路下游靶点c-myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、TCF-1 mRNA和蛋白在细胞分化前后的表达情况。
结果NSC67657可诱导HL-60细胞向单核系分化。10 μmol/L NSC67657作用5 d后,处理组CD14+细胞数为(94.37±2.84)%,高于未处理组[(1.31±0.09)%],差异有统计学意义(P<0.01)。处理组G1/G0期细胞所占比例为(76.46±2.83)%,高于未处理组[(59.40±5.42)%],差异有统计学意义(P<0.05);处理组S期细胞所占比例为(18.76±0.98)%,低于未处理组[(34.38±2.61)%],差异有统计学意义(P<0.05)。药物作用后HL-60细胞中ICAT mRNA和蛋白的表达水平上调(均P<0.01),β-catenin mRNA和蛋白的表达水平下调(均P<0.01),细胞核中β-catenin蛋白的表达水平下调(P<0.01)。处理组和未处理组HL-60细胞中TCF-4 mRNA、总蛋白和细胞核蛋白的表达水平差异均无统计学意义(均P>0.05)。药物诱导HL-60细胞分化后,Wnt信号通路下游靶基因c-myc、cyclin D1、TCF-1 mRNA和蛋白的表达水平均下调(均P<0.05)。
结论NSC67657可诱导HL-60细胞向单核系分化,导致Wnt信号通路关键调节因子β-catenin及下游靶点的表达下调,Wnt信号通路可能直接或间接地参与了HL-60细胞的单核系分化进程。
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