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在光照60%、相对湿度70%下,测试温度、TMV浓度对心叶烟出斑数和出斑时间的影响。同时,用原生质体法,建立原生质体中复制的TMV的最佳接种浓度。得出结论：心叶烟温度在26-30℃,TMV浓度在24-29μg/ml（质量浓度）时,每半片叶出斑约60个,出斑时间约70小时,为半叶枯斑法的最佳条件。