穿心莲内酯对铜绿假单胞菌PAO1生物被膜形成的影响及对lasR/rhlR表达的调控机制

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目的:研究穿心莲内酯对铜绿假单胞菌PAO1生物被膜(BF)形成的影响及对群体感应系统(QS)相关基因lasR/rhlR mRNA表达的调控作用。方法:利用扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)直接观察在不同浓度穿心莲内酯(3μg/ml和30μg/ml)作用下,培养72 h的PAO1 BF的生长状态;采用结晶紫定量测定法定量检测穿心莲内酯在300、250、200、150、100、50、25、15、10、5μg/ml剂量下,对72 h内PAO1形成BF厚度的影响;采用实时定量荧光PCR(Real-Time PCR)法考察穿心莲内酯对PAO1 BF形成相关基因lasR/rhlR mRNA表达的影响。结果:空白对照组PAO1在培养72 h后可形成分化成熟、较厚、密布有孔状通道,并在PAO1菌体周围呈团块、形态似"塔状"或"蘑菇状"的不规则BF结构,穿心莲内酯低剂量(3μg/ml)下,BF明显稀薄且平整,高剂量(30μg/ml)下,PAO1分散附着,均未见明显的BF结构。穿心莲内酯在300、250、200、150、100、50、25、20、10、5μg/ml剂量下,72 h内均可影响PAO1 BF的生长,在20μg/ml以上剂量,12、24、36、48、60、72 h时BF厚度明显变薄。与空白组比较,穿心莲内酯在37.5、75μg/ml剂量下均可下调lasR和rhlR基因mRNA的表达。结论:穿心莲内酯可以抑制PAO1 BF形成,该作用机制与下调细菌QS系统中lasR/rhlR基因mRNA表达相关。
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