研究脓肿分枝杆菌复合群亚种鉴定的有效方法。
方法将19株克拉霉素敏感的脓肿分枝杆菌临床分离株扩增hsp65和rpoB基因相关序列,分别用Mega软件和PhyML软件单独及联合对其构建系统进化树以鉴定其亚种,对鉴定结果不一致的菌株进行16S-23S间隔序列测序加以判定。扩增分析rrl和erm(41)基因特征,采用微量肉汤稀释法对菌株进行克拉霉素诱导耐药检测,分析各亚种的基因表型模式。
结果19株脓肿分枝杆菌复合群中,hsp65和rpoB基因鉴定结果一致的有Mycobacterium massiliense(M. massiliense)亚种10株、Mycobacterium abscessus(M.abscessus)亚种4株和Mycobacterium bolletii(M. bolletii)亚种1株,其余4株采用hsp65基因分类为M. massiliense,采用rpoB基因分类为M.abscessus,最终采用间隔序列测序鉴定为M. massiliense。rrl基因分析19株均未发现与克拉霉素耐药相关的突变。erm(41)基因分析结果表明,M.abscessus的-35位启动子序列与M. bolletii和M. massiliense不同,第28位碱基存在多态性(T28或C28),M. bolletii和M. massiliense的-35位启动子序列及第28位碱基分子特征一致。14株M. massiliense菌株均存在erm(41)基因276 bp长片段和2 bp短片段缺失,4株M.abscessus和1株M. bolletii均携带完整的erm(41)基因。克拉霉素诱导耐药试验结果显示,3株携带T28的M.abscessus(菌株号:CI02、CI04和CI12)和1株M. bolletii均可诱导产生克拉霉素高水平耐药,其余14株M. massiliense和1株携带C28多态性的M.abscessus(菌株号:CI17)对克拉霉素始终保持敏感。暂未发现-35位启动子序列差异与克拉霉素诱导耐药相关。
结论hsp65基因适用于脓肿分枝杆菌复合群亚种分子鉴定,且脓肿分枝杆菌复合群的erm(41)基因分子特征及相关克拉霉素诱导耐药表型特征均有亚种特异性,hsp65基因和erm(41)基因检测可用于脓肿分枝杆菌复合群亚种鉴定。