观察微小RNA-218(miR-218)靶定SOX5对胶质瘤细胞生长和侵袭的影响。
方法培养U87胶质瘤细胞株,将其分为对照组、无义序列组和miR-218转染组。取40例胶质瘤组织标本,35例正常脑组织。利用生物信息学方法、荧光素酶报告系统验证SOX5是miR-218的直接作用靶点。通过RT-PCR和Western blot方法检测U87细胞、胶质瘤组织及其正常脑组织中miR-218对SOX5 mRNA和蛋白表达的影响。在U87细胞中过表达miR-218后,利用MTT实验、Tanswell实验检测U87细胞表型的变化。利用RNA干扰技术沉默SOX5,利用MTT实验、Tanswell实验检测U87细胞表型的变化。
结果与对照组、无义序列组比较,miRNA-218转染组的miRNA-218相对表达量升高42.2倍;MTT法结果显示,过表达miRNA-218后,胶质瘤细胞生长明显受到抑制,第5天细胞增殖率仅为49.2%;Transwell法结果显示,miRNA-218组穿过Transwell小室的细胞数为(13.0±2.1)个,低于对照组和无义序列组的(35.0±2.3)个和(32.0±3.1)个(均P<0.05)。生物学信息预测SOX5是miR-218的靶基因之一,在SOX5 3′端非编码区含有miR-218的结合位点;双荧光素酶实验提示,SOX5为miR-218的直接作用靶点。过表达miR-218后,RT-PCR和Western blot检测显示,miR-218转染组SOX5 mRNA和蛋白的表达明显低于对照组和无义序列组,差异有统计学意义(P<0.01)。与正常脑组织比较,胶质瘤组织中miRA-218 mRNA的相对表达量降低,而SOX5 mRNA相对表达量升高(P<0.01)。沉默SOX5后,MTT法结果显示,细胞培养第5天,SOX5沉默[小干扰RNA(siRNA)-SOX5]组细胞增值率仅为siControl(无序列)组的51.0%;Transwell法分析显示,SOX5沉默组穿过Transwell小室的细胞数为(12.0±1.3)个,低于siControl组的(23.0±2.0)个(P<0.05)。
结论SOX5是miR-218的靶基因,并受其负向调控。miR-218可能通过靶定SOX5在胶质瘤的发病机制中起重要作用。