目的 观察低剂量环磷酰胺(CYC)抑制荷瘤小鼠体内微环境对改善细胞毒性T淋巴细胞(CTL)瘤体内存留、分布和功能的作用.方法 体外制备黑色素瘤抗原特异性CTL并进行荧光染料2-羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记和培养.建立C57BL/6小鼠荷瘤模型并分为生理盐水腹腔注射(NSI)+ CTL组和环磷酰胺腹腔注射(CYCI)+ CTL组,各40只,每组小鼠分别腹腔注入等量生理盐水(NS)或环磷酰胺(CYC).检测注射前、后小鼠脾脏调节性T细胞(Tregs)和血清白细胞介素(IL)-10、转化生长因子(TGF)-β水平.注射后第4天回输CTL,流式细胞检测对比两组瘤体内CTL荧光强度和细胞周期.实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测对比两组瘤体内干扰素(IFN)-γ、IL-2、颗粒酶、穿孔素mRNA表达.激光共聚焦观测两组CFSE阳性CTL分布.对比肿瘤体积.结果 两组小鼠于CYC或NS注射后第4天Tregs/CD4+(0.05 ±0.00比0.27±0.07,P＜0.05)和IL-10[(26.89 ±0.12) ng/L比(47.64±1.40) ng/L,P＜0.05]显著降低;TGF-β第7天降至最低[(4.00 ±0.12) ng/L比(9.80 ±0.36) ng/L,P＜0.05].CTL回输后第3天始CYCI+CTL组瘤体内荧光强度比NSI+ CTL组明显增高且持久(91.90±1.37比39.70±2.10,P＜0.05);两组各期细胞比例差异无统计学意义(P＞0.05).两组瘤体内颗粒酶、穿孔素、IL-2和IFN-γ表达差异均有统计学意义(P＜0.05);两组间肿瘤生长抑制自CTL回输后第6～15天尤为显著(P＜0.05).结论 采用低剂量CYC对体内微环境进行提前干预,可同时降低Treg、IL-10和TGF-β水平,使回输CTL在肿瘤内的归巢存留明显增强,杀伤效率提高,肿瘤生长抑制。
通过干扰肿瘤微环境改善抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞瘤体内存留、分布和免疫杀伤效率的研究
【摘 要】
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目的 观察低剂量环磷酰胺(CYC)抑制荷瘤小鼠体内微环境对改善细胞毒性T淋巴细胞(CTL)瘤体内存留、分布和功能的作用.方法 体外制备黑色素瘤抗原特异性CTL并进行荧光染料2-羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记和培养.建立C57BL/6小鼠荷瘤模型并分为生理盐水腹腔注射(NSI)+ CTL组和环磷酰胺腹腔注射(CYCI)+ CTL组,各40只,每组小鼠分别腹腔注入等量生理盐水(NS)或
【机 构】
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050000石家庄,河北医科大学第二医院小儿外科,050000石家庄,河北医科大学第二医院小儿外科,050000石家庄,河北医科大学第二医院小儿外科,050000石家庄,河北医科大学第二医院小儿外科,
【出 处】
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中华实验外科杂志
【发表日期】
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2014年31期
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