【摘 要】
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目的观察亮氨酸对3T3-L1前脂肪细胞分化和分化后脂肪生成的影响并初步探讨其机制。方法培养3T3-L1前脂肪细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测0.0(对照组)、0.5、1.0和2.0 mmol/L亮氨酸处理2 d对细胞增殖的影响。诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,分别在诱导开始(维持整个分化过程)以及分化完成后(持续4 d)进行亮氨酸处理。油红O染色检测细胞中脂滴数,收集培养基,测定其甘油含量
【机 构】
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215123 苏州大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室;苏州开拓药业有限公司,苏州大学放射医学与防护学院 江苏省高校放射医学协同创新中心,215123 苏州大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室,2
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目的观察亮氨酸对3T3-L1前脂肪细胞分化和分化后脂肪生成的影响并初步探讨其机制。
方法培养3T3-L1前脂肪细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测0.0(对照组)、0.5、1.0和2.0 mmol/L亮氨酸处理2 d对细胞增殖的影响。诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,分别在诱导开始(维持整个分化过程)以及分化完成后(持续4 d)进行亮氨酸处理。油红O染色检测细胞中脂滴数,收集培养基,测定其甘油含量,同时采用Western blot法测定脂肪分解相关酶、瘦素信号通路相关蛋白的表达水平。
结果通过0.0、0.5、1.0和2.0 mmol/L亮氨酸处理后细胞存活率分别为(100.00±12.10)%, (102.73±12.38)%, (103.94±14.65)%和(108.70±5.05)%,差异无统计学意义(F=1.07, P=0.383)。细胞分化过程中,0.0、0.5、1.0、2.0 mmol/L亮氨酸处理组的脂滴相对数分别为1.00±0.06、0.94±0.09、0.82±0.08和0.79±0.04(F=11.74, P<0.001),1.0、2.0 mmol/L亮氨酸组低于对照组(P值分别0.002、<0.001);分化完成后亮氨酸处理的各组脂滴相对数的差异无统计学意义(F=0.16, P=0.924)。细胞分化过程中用0.0、0.5、1.0和2.0 mmol/L亮氨酸处理,培养基中甘油含量增值分别为(65.04±11.75)、(71.45±23.71)、(79.37±17.63)和(110.32±25.36) μmol/L(F=2.92, P=0.100),2.0 mmol/L亮氨酸组含量高于对照组(t=2.73, P=0.026);分化完成后亮氨酸处理的各组甘油含量增值的差异无统计学意义(F=0.80, P=0.528)。分化过程中采用亮氨酸处理,上调了磷酸化激素敏感脂肪酶的蛋白表达[采用0.0、2.0 mmol/L浓度的亮氨酸处理后,蛋白相对表达水平分别为1.00±0.08、2.54±0.27(P<0.001)],下调了脂滴包被蛋白、瘦素和瘦素通路相关的瘦素受体、Janus激酶2和信号转导和转录激活因子的蛋白的表达[采用0.0、2.0 mmol/L浓度的亮氨酸处理后,相应蛋白相对表达水平分别为[(1.00±0.03)比(0.31±0.07)、(1.00±0.08)比(0.22±0.07)、(1.00±0.07)比(0.21±0.04)、(1.00±0.03)比(0.35±0.05)、(1.00±0.06)比(0.34±0.05),P值均<0.001]。
结论亮氨酸通过调控脂肪分解酶和瘦素信号通路抑制了脂肪细胞分化过程中脂肪的形成,但对分化完成后的脂肪细胞无影响。
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