微小毛霉凝乳酶的分泌表达、产物纯化及鉴定

来源 :吉林农业大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yaoyanfeiyu
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采用基因工程的方法对微小毛霉(Mucorpusillus)凝乳酶进行分子改造,获得适于乳品工业生产用的凝乳酶,克隆到了微小毛霉凝乳酶基因,构建了酵母表达质粒pPIC9K/M。线性化后电击转入毕赤酵母GS115,在甲醇诱导下进行凝乳酶的初步发酵试验,通过pH反应及酶抑制反应试验证明,重组凝乳酶获得了分泌表达。SDS—PAGE分析表明重组凝乳酶的分子量约为46kD,与理论值(45.3kD)基本相符,培养基上清液中凝乳酶的活性为311.8U/mL,纯化的总回收率为51.89%,纯度达到92%。
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