【摘 要】
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目的构建含绿色荧光蛋白报告基因的真核表达质粒pEGFP—N1-hIL-1Ra，稳定转染兔软骨细胞后检测其表达。方法通过RT—PCR扩增hIL-1Ra基因，并在两端添加HindⅢ和BamHⅠ酶切位点。
【机 构】
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江汉大学医学与生命科学院,湖北省中医院放射科
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目的构建含绿色荧光蛋白报告基因的真核表达质粒pEGFP—N1-hIL-1Ra，稳定转染兔软骨细胞后检测其表达。方法通过RT—PCR扩增hIL-1Ra基因，并在两端添加HindⅢ和BamHⅠ酶切位点。将pEGFP—N1载体经BamHⅠ酶切后电泳鉴定，利用定向克隆技术将经HindⅢ和BamHⅠ双酶切后的hIL-1Ra基因片段和pEGFP-N1载体经T4连接酶进行连接。重组的pEGFP—N1-hIL-1Ra在大肠杆菌DH5α感受态细胞内扩增，经过酶切电泳鉴定和DNA测序证明质粒构建是否成功。将构建正确的pEGF
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