GST-Exendin-4在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化

来源 :生物技术通报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：dashunyy

【摘要】

：

为了制备GST-Exendin-4融合蛋白，以本实验室构建好的pET22b．Exendin．4为模板。通过PCR扩增出Exendin-4基因，酶切克隆入pGEX-4T-1，构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Exendin-4。经DNA测序

【作者】

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张怡周庆峰贾孟张红绪李成伟

【机构】

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周口师范学院生命科学系植物遗传与分子育种重点实验室,商丘师范学院生命科学系,河南师范大学生命科学学院

【出处】

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生物技术通报

【发表日期】

：

2011年6期

【关键词】

：

EXENDIN-4 融合蛋白可溶表达亲和纯化 Exendin-4 Fusion protein Soluble expression Affinity pu

【基金项目】

：

国家自然科学基金资助项目(30901877),河南省科技厅社会发展项目(092102310209),河南省教育厅自然科学研究计划项目(2009B180021)

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为了制备GST-Exendin-4融合蛋白，以本实验室构建好的pET22b．Exendin．4为模板。通过PCR扩增出Exendin-4基因，酶切克隆入pGEX-4T-1，构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Exendin-4。经DNA测序证实插入序列与设计完全一致后，将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），在不同浓度的IPTG和不同温度诱导下，经SDS-PAGE分析鉴定，表达出Mr约为30kD的目的蛋白，灰度扫描显示目的蛋白占菌体总蛋白的29．9％，超声裂解后的上清通过Sepharose4B亲和层析纯

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