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摘要：通过酸水解法对穿龙薯蓣种子中的皂苷元进行了含量测定，结果表明：相对于根茎，薯蓣种子中所含皂苷元较少，并含有糖，生物碱，萜类等多种化合物。
关键词：穿龙薯蓣种子；酸水解法；薯蓣皂苷元
中图分类号：S6321文献标识码：A
为本文通讯作者穿龙薯蓣（Dioscorea nipponica Makino）为薯蓣科薯蓣属植物，根茎入药，具有治疗冠心病、心绞痛[1]、风湿类风湿关节炎[2]、抑制癌细胞增殖[3] 等作用，近代药理研究表明，它还具有镇咳、祛痰、平喘、调节免疫和改善心血管功能等作用[4]。主要药用成分为薯蓣皂苷（Dioscin）及水解后产生的薯蓣皂苷元（Diosgenin）[5]，后者属于甾体类化合物，是合成多种甾体激素类和避孕类药物的重要原料之一[6]。
近年来随着市场对合成甾体激素类药物需求量的激增，对能够用于合成多种甾体激素类药物的穿龙薯蓣皂素的需求量也随增加之。然而，由于植物生存环境的破坏和人为无序的大规模采挖，穿龙薯蓣野生资源已经不多，接近濒危状态，现被国家列为二级保护植物[7]。因此，为了实现穿龙薯蓣资源的可持续利用，满足市场需求，必须加强野生资源保护和大力发展人工栽培，然而人工栽培存在许多不足之处：采用根茎进行无性繁殖，不仅需种量大，繁殖系数低，而且无性繁殖材料在贮藏及栽培过程中易感染病害，造成组织衰老退化[8]；采用种子繁殖，不仅苗期长，而且定植后5年才可收获根茎[9]。因此，靠自然资源已难满足生产需要。虽然有少量的关于穿龙薯蓣的组培快繁的报道[10-12]，但是都还没有形成系统的可行的生产规模，因此要解决这个问题只能从提高资源本身的利用率上来考虑，本实验对穿龙薯蓣的种子的化学成分进行了初步的研究，以便于更好的、充分的利用其种子资源。
1材料和方法
11实验材料
穿龙薯蓣种子采于辽宁省青原县穿龙薯蓣基地，经吉林农业大学中药材学院赵淑春教授鉴定为穿龙薯蓣种子。
12实验仪器
索氏提取器、旋转蒸发器Re-52A、ZK072型电热真空干燥箱、RS2105型电子天秤等。
13实验方法
131准确称取烘干的15g薯蓣种子碎片，酸水解6小时，水解物于80℃下干燥，用石油醚回流提取6小时，提取液常压回收至10～15mL。
132提取液冷置至乙醚挥干，仅有一层黄色粘稠状液体，用乙醇加热溶解，分两层，用分液漏斗分层，下层为黄色粘稠状液体，上层为澄清液体。取下层液加入NaOH溶液。
133取上清液点（TLC）薄层层析板。
氨基酸的定性反应：将点样板置于展开剂（氯仿：甲醇：水=65：35：10取下层液）中展开的，用茚三酮（02g茚三酮溶于100mL乙醇中）显色，置于110℃烘箱中烘干。
糖的定性反应：将点样板置于展开剂（氯仿：甲醇：水=65：35：10取下层液）中展开，用咔唑-硫酸（05g咔唑，5mL硫酸，溶于95mL乙醇中）显色，置于110℃烘箱中烘干。
黄酮的定性反应：将点样板置于展开剂（氯仿：甲醇：水=65：35：10取下层液）的中展开，用碱式乙酸铅试剂（饱和碱式乙酸铅水溶液）显色，置于110℃烘箱中烘干。
生物碱的定性反应：将点样板置于展开剂（石油醚：乙酸乙醋=7：3）中展开，用碘碘化钾（02g碘与04g碘化钾溶于100mL水中）显色，置于110℃烘箱中烘干。
萜类的定性反应：将点样板置于展开剂（石油醚：乙酸乙酯=7：3）中展开，用香草醛一硫酸（香草醛05g溶于100mL硫酸—乙醇（4：1）中）显色，置于110℃烘箱中烘干。
薯蓣皂苷元的定性反应，将点样板置于展开剂（石油醚：乙醇乙酯=7：3）中展开，用10%浓硫酸显色，置于110℃烘箱中烘干。
2结果与分析
21结果
211穿龙薯蓣种子酸水解乙醚提取物用乙醇加热溶解后的下层液，加入NaOH溶液后有肥皂泡产生。
212薄层板显色结果
氨基酸点样板不显色；糖点样板显红色；黄酮点样板不显色；生物碱点样板显黄褐色；萜类点样板有两个点显灰褐色；薯蓣皂苷元点样板有3个点显紫褐色。
22分析
221在211过程中，下层黄色粘稠状液体与NaOH溶液反应后产生肥皂泡，发生了皂化反应，说明薯蓣种子中含有油脂，经过电子天平精确称量得到：M总=205748g M杯=191498g M油=14250g从而计算出每1g种子中油脂的粗含量为95%。
222通过薄层层析板的显色情况证明穿龙薯蓣种子酸水解乙醚提取物乙醇溶液中不含有氨基酸类物质。
223薄层层析板上呈红色斑点，证明穿龙薯蓣种子酸水解乙醚提取物乙醇溶液中含糖类物质。
224由于薄层层析板上不显色，证明穿龙薯蓣种子酸水解乙醚提取物乙醇溶液中不含黄酮类物质。
225薄层层析板上现了一条黄褐色的带状线，证明穿龙薯蓣种子酸水解乙醚提取物乙醇溶液中含有生物碱类物质。
226薄层析板上出现两个灰褐色斑点，其Rf值分别为0612和0873，证明穿龙薯蓣种子酸水解乙醚提取物乙醇溶液中至少含有两种萜类物质。
227薄层层析板上出现了3个紫褐色的斑点，其Rf值分别为0735、08601和0977，证明穿龙薯蓣种子酸水解乙醚提取物乙醇溶液中至少含有三种不同的薯蓣皂苷元。
3小结
本试验结果表明，穿龙薯蓣种子中含有多种有机化合物，其中包括油脂，萜类，生物碱，糖和薯蓣皂苷元。其中油脂含量最高达95%，其它四种一共含061%，说明种子中薯蓣皂苷元含量远低于根茎的平均含量2%，但是目前穿龙薯蓣的种子除了用来繁殖外，还没被人们利用，而其每年的产量也非常大，本研究仅对穿龙薯蓣种子化学成分进行了检测以及粗含量测定，发现穿龙薯蓣种子中也含有薯蓣皂苷元，虽然其含量少，但是也可以开发利用，我们也可以开发利用其中的油脂，萜类，生物碱，糖等物质，达到充分利用资源的目的。
参考文献
[1]杨波.HPLC测定地奥心血康胶囊中薯蓣皂苷元的含量[J].中国中医药杂志，2006，31（07）：605-606.
[2]刘铁城.穿龙薯蓣野生资源保护及利用[J].中华医学杂志，1977，57（08）：520.
[3]杨太新，陈凯，杜艳华，等.穿龙薯蓣的研究进展与发展前景[J].邯郸农业高等专科学校学报，2003，20（04）：14-16.
[4]李景华，王化田，张成军.穿龙薯蓣种群生命表的研究[J].木本植物研究，2000，20（04）：444-449.
[5]刘铁城.穿龙薯蓣的资源调查与人工栽培[J].中药通报，1985，10（12）：6-7.
[6]柳全文.山东中医杂志，1998，17（01）：29.
[7]傅立国，金鉴明等.中国植物红皮书（第1册）[M].北京：北京科学出版社，1992：178-179.
[8]郑吉林，张继军，吕春林.林药间作穿山龙[J].特种经济动植物，2002（05）：24.
[9]李际红，谢会成，许建农，等.穿山薯蓣不定芽的诱导与植株再生[J].山东农业大学学报（自然科学版），2005，36（01）：82-85.
[10]陈凤清，付杨，孙冬雪，等.穿龙薯蓣的微块茎离体诱导及再生植株的建立[J].东北师大学报（自然科学版），2005，37（04）：90-93.
[11]张数鑫，于元杰，韩继武，等.穿山龙愈伤组织培养研究[J].中国农学通报，2005，21（07）：77-78，114.
[12]罗凤霞，祝朋芳，周广柱，等.穿龙薯蓣的组织培养与快速繁殖[J].植物生理学通报，2004，40（03）：329.
作者简介：郑海婷（1983-）女，吉林松原人，助理工程师，主要从事长白山野生植物资源研究。李江楠（1981-）女，四川巴中人，硕士，助理研究员，主要从事长白山药用植物资源开发与利用研究。
关键词：穿龙薯蓣种子；酸水解法；薯蓣皂苷元
中图分类号：S6321文献标识码：A
为本文通讯作者穿龙薯蓣（Dioscorea nipponica Makino）为薯蓣科薯蓣属植物，根茎入药，具有治疗冠心病、心绞痛[1]、风湿类风湿关节炎[2]、抑制癌细胞增殖[3] 等作用，近代药理研究表明，它还具有镇咳、祛痰、平喘、调节免疫和改善心血管功能等作用[4]。主要药用成分为薯蓣皂苷（Dioscin）及水解后产生的薯蓣皂苷元（Diosgenin）[5]，后者属于甾体类化合物，是合成多种甾体激素类和避孕类药物的重要原料之一[6]。
近年来随着市场对合成甾体激素类药物需求量的激增，对能够用于合成多种甾体激素类药物的穿龙薯蓣皂素的需求量也随增加之。然而，由于植物生存环境的破坏和人为无序的大规模采挖，穿龙薯蓣野生资源已经不多，接近濒危状态，现被国家列为二级保护植物[7]。因此，为了实现穿龙薯蓣资源的可持续利用，满足市场需求，必须加强野生资源保护和大力发展人工栽培，然而人工栽培存在许多不足之处：采用根茎进行无性繁殖，不仅需种量大，繁殖系数低，而且无性繁殖材料在贮藏及栽培过程中易感染病害，造成组织衰老退化[8]；采用种子繁殖，不仅苗期长，而且定植后5年才可收获根茎[9]。因此，靠自然资源已难满足生产需要。虽然有少量的关于穿龙薯蓣的组培快繁的报道[10-12]，但是都还没有形成系统的可行的生产规模，因此要解决这个问题只能从提高资源本身的利用率上来考虑，本实验对穿龙薯蓣的种子的化学成分进行了初步的研究，以便于更好的、充分的利用其种子资源。
1材料和方法
11实验材料
穿龙薯蓣种子采于辽宁省青原县穿龙薯蓣基地，经吉林农业大学中药材学院赵淑春教授鉴定为穿龙薯蓣种子。
12实验仪器
索氏提取器、旋转蒸发器Re-52A、ZK072型电热真空干燥箱、RS2105型电子天秤等。
13实验方法
131准确称取烘干的15g薯蓣种子碎片，酸水解6小时，水解物于80℃下干燥，用石油醚回流提取6小时，提取液常压回收至10～15mL。
132提取液冷置至乙醚挥干，仅有一层黄色粘稠状液体，用乙醇加热溶解，分两层，用分液漏斗分层，下层为黄色粘稠状液体，上层为澄清液体。取下层液加入NaOH溶液。
133取上清液点（TLC）薄层层析板。
氨基酸的定性反应：将点样板置于展开剂（氯仿：甲醇：水=65：35：10取下层液）中展开的，用茚三酮（02g茚三酮溶于100mL乙醇中）显色，置于110℃烘箱中烘干。
糖的定性反应：将点样板置于展开剂（氯仿：甲醇：水=65：35：10取下层液）中展开，用咔唑-硫酸（05g咔唑，5mL硫酸，溶于95mL乙醇中）显色，置于110℃烘箱中烘干。
黄酮的定性反应：将点样板置于展开剂（氯仿：甲醇：水=65：35：10取下层液）的中展开，用碱式乙酸铅试剂（饱和碱式乙酸铅水溶液）显色，置于110℃烘箱中烘干。
生物碱的定性反应：将点样板置于展开剂（石油醚：乙酸乙醋=7：3）中展开，用碘碘化钾（02g碘与04g碘化钾溶于100mL水中）显色，置于110℃烘箱中烘干。
萜类的定性反应：将点样板置于展开剂（石油醚：乙酸乙酯=7：3）中展开，用香草醛一硫酸（香草醛05g溶于100mL硫酸—乙醇（4：1）中）显色，置于110℃烘箱中烘干。
薯蓣皂苷元的定性反应，将点样板置于展开剂（石油醚：乙醇乙酯=7：3）中展开，用10%浓硫酸显色，置于110℃烘箱中烘干。
2结果与分析
21结果
211穿龙薯蓣种子酸水解乙醚提取物用乙醇加热溶解后的下层液，加入NaOH溶液后有肥皂泡产生。
212薄层板显色结果
氨基酸点样板不显色；糖点样板显红色；黄酮点样板不显色；生物碱点样板显黄褐色；萜类点样板有两个点显灰褐色；薯蓣皂苷元点样板有3个点显紫褐色。
22分析
221在211过程中，下层黄色粘稠状液体与NaOH溶液反应后产生肥皂泡，发生了皂化反应，说明薯蓣种子中含有油脂，经过电子天平精确称量得到：M总=205748g M杯=191498g M油=14250g从而计算出每1g种子中油脂的粗含量为95%。
222通过薄层层析板的显色情况证明穿龙薯蓣种子酸水解乙醚提取物乙醇溶液中不含有氨基酸类物质。
223薄层层析板上呈红色斑点，证明穿龙薯蓣种子酸水解乙醚提取物乙醇溶液中含糖类物质。
224由于薄层层析板上不显色，证明穿龙薯蓣种子酸水解乙醚提取物乙醇溶液中不含黄酮类物质。
225薄层层析板上现了一条黄褐色的带状线，证明穿龙薯蓣种子酸水解乙醚提取物乙醇溶液中含有生物碱类物质。
226薄层析板上出现两个灰褐色斑点，其Rf值分别为0612和0873，证明穿龙薯蓣种子酸水解乙醚提取物乙醇溶液中至少含有两种萜类物质。
227薄层层析板上出现了3个紫褐色的斑点，其Rf值分别为0735、08601和0977，证明穿龙薯蓣种子酸水解乙醚提取物乙醇溶液中至少含有三种不同的薯蓣皂苷元。
3小结
本试验结果表明，穿龙薯蓣种子中含有多种有机化合物，其中包括油脂，萜类，生物碱，糖和薯蓣皂苷元。其中油脂含量最高达95%，其它四种一共含061%，说明种子中薯蓣皂苷元含量远低于根茎的平均含量2%，但是目前穿龙薯蓣的种子除了用来繁殖外，还没被人们利用，而其每年的产量也非常大，本研究仅对穿龙薯蓣种子化学成分进行了检测以及粗含量测定，发现穿龙薯蓣种子中也含有薯蓣皂苷元，虽然其含量少，但是也可以开发利用，我们也可以开发利用其中的油脂，萜类，生物碱，糖等物质，达到充分利用资源的目的。
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[5]刘铁城.穿龙薯蓣的资源调查与人工栽培[J].中药通报，1985，10（12）：6-7.
[6]柳全文.山东中医杂志，1998，17（01）：29.
[7]傅立国，金鉴明等.中国植物红皮书（第1册）[M].北京：北京科学出版社，1992：178-179.
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[9]李际红，谢会成，许建农，等.穿山薯蓣不定芽的诱导与植株再生[J].山东农业大学学报（自然科学版），2005，36（01）：82-85.
[10]陈凤清，付杨，孙冬雪，等.穿龙薯蓣的微块茎离体诱导及再生植株的建立[J].东北师大学报（自然科学版），2005，37（04）：90-93.
[11]张数鑫，于元杰，韩继武，等.穿山龙愈伤组织培养研究[J].中国农学通报，2005，21（07）：77-78，114.
[12]罗凤霞，祝朋芳，周广柱，等.穿龙薯蓣的组织培养与快速繁殖[J].植物生理学通报，2004，40（03）：329.
作者简介：郑海婷（1983-）女，吉林松原人，助理工程师，主要从事长白山野生植物资源研究。李江楠（1981-）女，四川巴中人，硕士，助理研究员，主要从事长白山药用植物资源开发与利用研究。