【摘 要】
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目的 研究人BMP-4腺病毒表达载体(adenovirus human BMP-4,Ad-hBMP-4)转染体外培养人退变腰椎间盘细胞后,对细胞蛋白多糖、Ⅱ型胶原及Sox9表达的影响. 方法 取Ad-hBMP-4重组
【机 构】
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重庆医科大学附属第一医院骨科 重庆,400016
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目的 研究人BMP-4腺病毒表达载体(adenovirus human BMP-4,Ad-hBMP-4)转染体外培养人退变腰椎间盘细胞后,对细胞蛋白多糖、Ⅱ型胶原及Sox9表达的影响. 方法 取Ad-hBMP-4重组腺病毒进行扩增,并检测病毒滴度.取Modic Ⅲ级、27～50岁腰椎间盘突出症患者自愿捐赠的退变椎间盘体外分离、培养椎间盘细胞,激光共聚焦显微镜观察Ⅱ型胶原在细胞中的表达.取第1代椎间盘细胞转染Ad-hBMP-4重组腺病毒(实验组),应用RT-PCR和Western blot法分别检测病毒转染后3、6d细胞蛋白多糖、Ⅱ型胶原、Sox9基因及蛋白多糖、Ⅱ型胶原蛋白的表达,与未转染细胞(对照组)进行比较. 结果 Ad-hBMP-4重组腺病毒滴度为5×106 PFU/mL.激光共聚焦显微镜观察示Ⅱ型胶原主要表达于椎间盘细胞质.Ad-hBMP-4重组腺病毒转染后细胞形态无明显变化.转染3、6d后实验组蛋白多糖、Ⅱ型胶原、Sox9 mRNA表达以及蛋白多糖、Ⅱ型胶原蛋白表达均显著高于对照组,比较差异有统计学意义(P＜0.05); 实验组各指标3、6d间比较差异亦有统计学意义(P＜0.05). 结论 Ad-hBMP-4可有效转染体外培养人退变椎间盘细胞,促进细胞蛋白多糖、Ⅱ型胶原及Sox9表达,提示hBMP-4可能对早期退变的椎间盘具有修复功能.
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