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摘要：目的：考察接骨续筋胶囊中挥发油提取和包合的最佳制备工艺。方法：采用共水蒸馏法，以收油量为指标，利用单因素试验筛选挥发油的提取工艺；采用饱和水溶液法，以包合物收得率和包合率为评价指标，利用正交试验筛选包合工艺。结果本方挥发油提取的最佳工艺为：加10倍水，浸泡2h，共水蒸馏提取6h；最佳包合工艺为：挥发油与8—CD的比例为1:6，包合温度为50℃，搅拌时间为2h。结论用此法得到的挥发油提取率及B—CD包合物的包合率较高，包合物性质稳定，而且操作简单。
关键词：接骨续筋胶囊；挥发油；提取工艺；包合；正交设计
中图分类号：R927.2 文献标识码：A
文章编号：1007--2349(2009)09--0053--03
接骨续筋胶囊是由骨碎补、三七、川芎、当归、桂枝、川木香等药组成，具有接骨续筋，散瘀生新，行气止痛，通经活络的功效，在本院临床上主要用于治疗骨折，粉碎性骨折，骨不连，脱位，筋伤，关节疼痛等症。方中当归、川芎、桂枝、川木香中的挥发油为药理活性成分之一，现采用单因素试验对当归等药的挥发油提取工艺进行了研究，但若将挥发油直接药用，容易氧化变质，且稳定性较差，为了提高药材挥发油在制剂过程中的稳定性，保证疗效，通过正交实验L9(34)实验对其挥发油进行β—CD包合，以包合物收得率和包合率为评价指标，优选出饱和水溶液法制备包合物的最佳工艺条件，为这几味药的挥发油粉末化参与制剂生产提供了依据。
1 材料与仪器
材料：当归、川芎、桂枝、川木香药材(购于成都市荷花池中药材市场，经鉴定符合《中国药典》2005版相关规定)、β—CD(上海伯奥生物科技有限公司)、无水乙醇等试剂均为分析纯。
仪器：挥发油提取器(四川大学玻璃仪器厂)、KUUDOSSK250HP型超声波清洗机(上海科导超声仪器有限公司)、85—2数显恒温磁力搅拌器(上海君竺仪器制作有限公司)、电子分析天平(d＝0.001g，北京赛多利斯天平有限公司)。
2 方法与结果
2，1挥发油提取工艺研究本方选择共水蒸馏法，以收油量为指标，采用单因素试验进行考察。影响挥发油提取效果的因素主要有药材粉碎度、浸泡时间、加水量、提取时间等。为了适应大生产的实际情况，处方药物均以饮片投料，故只考察其余3项。2，1，1药材吸水率的考察按处方比例，称取当归、川芎、桂枝、川木香药材共100g，加10倍量水浸泡，每30min观察药材浸透情况，直至药材完全浸透心(6h)。滤过，药渣称重，测得吸水率为141.3％。因此，挥发油提取时应额外加入1.5倍量水以补足药材的吸水量。2，1，2浸泡时间的考察按处方比例称取当归、川芎等药材5份，每份200g，各加8倍量水，分别浸泡0h、1h、2h、4h、12h，以收油量为指标，在相同条件下共水蒸馏法提取6h，结果见表1。
结果表明，浸泡2h后提取，挥发油的提取量没有增加，故将挥发油提取浸泡时间确认为2h。2，1，3加水量的考察按处方比例称取当归、川芎等药材4份，每份200g,分别加6倍、8倍、10倍、12倍量水，浸泡2h，以收油量为指标，在相同条件下共水蒸馏法提取6h，结果见表2。
结果表明，加水量为10倍以上时，挥发油几乎没有增加，故确认加水量为10倍。2，1，4提取时间的考察按处方比例，称取当归、川芎等药材3份，每份200g，各加10倍量水，浸泡2h，在相同条件下共水蒸馏法提取8h，以收油量为指标记录不同时间的挥发油收得量，结果见表3
结果表明，提取6h以后，挥发油量几乎没有增加，而且随着提取时间的延长，挥发油颜色加深，影响挥发油质量，故将挥发油提取时间确认为6h。2，1，5挥发油提取工艺验证试验从上述结果可知，本方挥发油提取的最佳工艺为：加10倍水，浸泡2h,共水蒸馏提取6h为确保提取工艺的准确可行，取3批药材进行验证试验，结果见表4。
结果表明，该挥发油提取工艺稳定可行。
2，2挥发油β—环糊精包合工艺研究2，2，1空白回收率试验精密量取1mL挥发油于500mL圆底烧瓶中，加蒸馏水200mL,然后按2005版《中国药典》一部附录xD挥发油测定法项下测定，计算挥发油空白回收率，结果见表5。
挥发油空白回收率(％)一(挥发油收得量／挥发油加入量)×100％
由上表可知，测得挥发油的空白回收率为82％。2，2，2评价指标的选择包合率为衡量包合效果的重要指标，包合率越高，包合效果越好，可作为包合工艺筛选的主要指标，权重系数定为0.7；但收得率在大生产中也有意义，在β一环糊精和挥发油投入量一定的情况下，收得率越高，包合效果越好，故收得率作为次要筛选指标，故权重系数定为0.3。
包合物收得率(％)＝[包合物／(β—CD加入量+挥发油加入量)]×100％
包合率(％)＝[包合物中挥发油回收量／(挥发油加入量×空白回收率)]×100％。2，2，3包合方法的选择根据文献及预试验可知，本方挥发油的包合采用饱和水溶液法，具有操作方便，设备要求不高，便于工业化生产等特点。β—CD包合挥发油的处理方法较多，有超声处理、搅拌、研磨等方法，现对此3种方法进行比较。称取一定量的β—CD，加100mL蒸馏水于水浴上加热溶解，放凉至40℃使之成饱和溶液，然后缓缓加入当归、川芎等药材的挥发油无水乙醇溶液，充分混匀，恒温50℃，分别超声、置研钵中研磨、用磁力机搅拌各1h，静置冷藏(0℃～5℃)24h，抽滤，沉淀用少许蒸馏水，石油醚各洗涤3次，40℃干燥5h，即得成品，结果见表6。
由上表可知，超声处理包合物收得率及包合率都高于研磨法和搅拌法，但超声法只略高于搅拌法，考虑到采用超声法对设备要求较高，且产量较小，不能满足大生产的需要，故对本方挥发油采用搅拌法处理。2，2，4挥发油包合工艺的考察在影响挥发油包合的主要因素有：油(mL)：β—CD(g)、包合时间、包合温度，故对以上3个因素，各取3个水平，以包合物收得率和包合率为考察指标，应用正交表进行试验，筛选最佳工艺，因素水平见表7。
正交试验结果：运用spss11.5对正交实验结果进行方差分析，试验数据及方差分析结果见表8、表9。
通过直观分析和方差分析，影响因素大小为B>A>C，A，C因素对挥发油的包合有显著性意义(P<0.05)，因素c无显著性影响。最佳包合工艺条件为AB2C2；即挥发油与β—CD的比例为1:6，包合温度为50℃，搅拌时间为2h。2，2，5验证实验根据上述结果所得的最佳包合工艺验证3批，结果见表10。
由上表可知，挥发油的β—CD包合工艺合理可行。
3 讨论
处方中的四味药主要含有轻油，同时也含有少量的重油，试验发现使用比重小于1的挥发油提取器也能较为完全的提取挥发油，为方便以后大生产的操作，故四味药材的挥发油采用轻油提取器提取。在挥发油的提取实验中，笔者还比较了各药分别提取和合提，对分提油量的总和与诸药合提油量总和进行t检验，P>0.05，说明两种方式提取挥发油没有显著性差异，从生产和节能降耗角度而言，确定选择当归、川芎、桂枝和川木香四味药合提的方式。
在挥发油的提取中，曾考虑了采用正交试验法，但又考虑到挥发油的提取试验次数不是很多，况且单因素筛选法设计全面，数据可靠，结果可比性强，能分析出事物的内在规律，故最终确定本方挥发油的提取采用单因素筛选法。
在实验中还发现转速对挥发油的包合有一定的影响，因此采用了单因素筛选搅拌速度，最终确定以400r／min的转速对挥发油进行包合。
关键词：接骨续筋胶囊；挥发油；提取工艺；包合；正交设计
中图分类号：R927.2 文献标识码：A
文章编号：1007--2349(2009)09--0053--03
接骨续筋胶囊是由骨碎补、三七、川芎、当归、桂枝、川木香等药组成，具有接骨续筋，散瘀生新，行气止痛，通经活络的功效，在本院临床上主要用于治疗骨折，粉碎性骨折，骨不连，脱位，筋伤，关节疼痛等症。方中当归、川芎、桂枝、川木香中的挥发油为药理活性成分之一，现采用单因素试验对当归等药的挥发油提取工艺进行了研究，但若将挥发油直接药用，容易氧化变质，且稳定性较差，为了提高药材挥发油在制剂过程中的稳定性，保证疗效，通过正交实验L9(34)实验对其挥发油进行β—CD包合，以包合物收得率和包合率为评价指标，优选出饱和水溶液法制备包合物的最佳工艺条件，为这几味药的挥发油粉末化参与制剂生产提供了依据。
1 材料与仪器
材料：当归、川芎、桂枝、川木香药材(购于成都市荷花池中药材市场，经鉴定符合《中国药典》2005版相关规定)、β—CD(上海伯奥生物科技有限公司)、无水乙醇等试剂均为分析纯。
仪器：挥发油提取器(四川大学玻璃仪器厂)、KUUDOSSK250HP型超声波清洗机(上海科导超声仪器有限公司)、85—2数显恒温磁力搅拌器(上海君竺仪器制作有限公司)、电子分析天平(d＝0.001g，北京赛多利斯天平有限公司)。
2 方法与结果
2，1挥发油提取工艺研究本方选择共水蒸馏法，以收油量为指标，采用单因素试验进行考察。影响挥发油提取效果的因素主要有药材粉碎度、浸泡时间、加水量、提取时间等。为了适应大生产的实际情况，处方药物均以饮片投料，故只考察其余3项。2，1，1药材吸水率的考察按处方比例，称取当归、川芎、桂枝、川木香药材共100g，加10倍量水浸泡，每30min观察药材浸透情况，直至药材完全浸透心(6h)。滤过，药渣称重，测得吸水率为141.3％。因此，挥发油提取时应额外加入1.5倍量水以补足药材的吸水量。2，1，2浸泡时间的考察按处方比例称取当归、川芎等药材5份，每份200g，各加8倍量水，分别浸泡0h、1h、2h、4h、12h，以收油量为指标，在相同条件下共水蒸馏法提取6h，结果见表1。
结果表明，浸泡2h后提取，挥发油的提取量没有增加，故将挥发油提取浸泡时间确认为2h。2，1，3加水量的考察按处方比例称取当归、川芎等药材4份，每份200g,分别加6倍、8倍、10倍、12倍量水，浸泡2h，以收油量为指标，在相同条件下共水蒸馏法提取6h，结果见表2。
结果表明，加水量为10倍以上时，挥发油几乎没有增加，故确认加水量为10倍。2，1，4提取时间的考察按处方比例，称取当归、川芎等药材3份，每份200g，各加10倍量水，浸泡2h，在相同条件下共水蒸馏法提取8h，以收油量为指标记录不同时间的挥发油收得量，结果见表3
结果表明，提取6h以后，挥发油量几乎没有增加，而且随着提取时间的延长，挥发油颜色加深，影响挥发油质量，故将挥发油提取时间确认为6h。2，1，5挥发油提取工艺验证试验从上述结果可知，本方挥发油提取的最佳工艺为：加10倍水，浸泡2h,共水蒸馏提取6h为确保提取工艺的准确可行，取3批药材进行验证试验，结果见表4。
结果表明，该挥发油提取工艺稳定可行。
2，2挥发油β—环糊精包合工艺研究2，2，1空白回收率试验精密量取1mL挥发油于500mL圆底烧瓶中，加蒸馏水200mL,然后按2005版《中国药典》一部附录xD挥发油测定法项下测定，计算挥发油空白回收率，结果见表5。
挥发油空白回收率(％)一(挥发油收得量／挥发油加入量)×100％
由上表可知，测得挥发油的空白回收率为82％。2，2，2评价指标的选择包合率为衡量包合效果的重要指标，包合率越高，包合效果越好，可作为包合工艺筛选的主要指标，权重系数定为0.7；但收得率在大生产中也有意义，在β一环糊精和挥发油投入量一定的情况下，收得率越高，包合效果越好，故收得率作为次要筛选指标，故权重系数定为0.3。
包合物收得率(％)＝[包合物／(β—CD加入量+挥发油加入量)]×100％
包合率(％)＝[包合物中挥发油回收量／(挥发油加入量×空白回收率)]×100％。2，2，3包合方法的选择根据文献及预试验可知，本方挥发油的包合采用饱和水溶液法，具有操作方便，设备要求不高，便于工业化生产等特点。β—CD包合挥发油的处理方法较多，有超声处理、搅拌、研磨等方法，现对此3种方法进行比较。称取一定量的β—CD，加100mL蒸馏水于水浴上加热溶解，放凉至40℃使之成饱和溶液，然后缓缓加入当归、川芎等药材的挥发油无水乙醇溶液，充分混匀，恒温50℃，分别超声、置研钵中研磨、用磁力机搅拌各1h，静置冷藏(0℃～5℃)24h，抽滤，沉淀用少许蒸馏水，石油醚各洗涤3次，40℃干燥5h，即得成品，结果见表6。
由上表可知，超声处理包合物收得率及包合率都高于研磨法和搅拌法，但超声法只略高于搅拌法，考虑到采用超声法对设备要求较高，且产量较小，不能满足大生产的需要，故对本方挥发油采用搅拌法处理。2，2，4挥发油包合工艺的考察在影响挥发油包合的主要因素有：油(mL)：β—CD(g)、包合时间、包合温度，故对以上3个因素，各取3个水平，以包合物收得率和包合率为考察指标，应用正交表进行试验，筛选最佳工艺，因素水平见表7。
正交试验结果：运用spss11.5对正交实验结果进行方差分析，试验数据及方差分析结果见表8、表9。
通过直观分析和方差分析，影响因素大小为B>A>C，A，C因素对挥发油的包合有显著性意义(P<0.05)，因素c无显著性影响。最佳包合工艺条件为A
由上表可知，挥发油的β—CD包合工艺合理可行。
3 讨论
处方中的四味药主要含有轻油，同时也含有少量的重油，试验发现使用比重小于1的挥发油提取器也能较为完全的提取挥发油，为方便以后大生产的操作，故四味药材的挥发油采用轻油提取器提取。在挥发油的提取实验中，笔者还比较了各药分别提取和合提，对分提油量的总和与诸药合提油量总和进行t检验，P>0.05，说明两种方式提取挥发油没有显著性差异，从生产和节能降耗角度而言，确定选择当归、川芎、桂枝和川木香四味药合提的方式。
在挥发油的提取中，曾考虑了采用正交试验法，但又考虑到挥发油的提取试验次数不是很多，况且单因素筛选法设计全面，数据可靠，结果可比性强，能分析出事物的内在规律，故最终确定本方挥发油的提取采用单因素筛选法。
在实验中还发现转速对挥发油的包合有一定的影响，因此采用了单因素筛选搅拌速度，最终确定以400r／min的转速对挥发油进行包合。