目的 探讨羊膜上皮细胞水通道蛋白3(AQP3)表达过程中环磷酸腺苷-蛋白激酶A(cAMP-PKA)信号传导通路的调控机制.方法 选择2012年l至11月温州医科大学附属第二医院无并发症、羊水量正常的足月孕妇30例,剖宫产时取羊膜进行上皮细胞培养,并进行如下分组实验:(1)毛喉素组:不同浓度的毛喉素(forskolin,0、2.5、5、50、100 μmol/L)作用羊膜上皮细胞2h,再以最适宜浓度的forskolin作用不同时间(0、1、2、10、20h)；(2)SP-cAMP组:不同浓度的PKA激动剂SP-cAMP(0、2.5、5、50、100 μmol/L)作用羊膜上皮细胞2h,再以最适宜浓度的SP-cAMP作用不同时间(0、1、2、10、20 h)；(3)H-89组:不同浓度的PKA抑制剂H-89(0、5、10、50、100 μmol/L)作用人羊膜上皮细胞2h,再以最适宜浓度H-89作用不同时间(0、1、2、10、20 h).采用ELISA方法检测各组细胞内CAMP水平及PKA活性,免疫细胞化学染色法检测AQP3表达定位,蛋白印迹法检测总cAMP反应元件结合蛋白(CREB)、磷酸化CREB(p-CREB)和AQP3表达水平,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖率.结果 (1)各组羊膜上皮细胞的胞质及胞膜均有AQP3蛋白表达.(2)各组不同浓度forskolin、SP-cAMP和H-89作用羊膜上皮细胞后,细胞增殖率无明显变化,分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).(3)不同浓度forskolin作用羊膜上皮细胞2h,总CREB表达水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).cAMP水平、PKA活性、p-CREB和AQP3表达水平分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05),2.5、5、50μmol/L forskolin作用后,上述4种因子均高于0μmol/L(P＜0.05)；而5 μmol/L明显高于2.5、50 μmol/L(P＜0.05).forskolin作用的最适宜浓度为5μmol/L.(4)不同浓度SP-cAMP作用羊膜上皮细胞2h,细胞中cAMP和总CREB表达水平分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).PKA活性、p-CREB和AQP3表达水平比较,差异均有统计学意义(P＜0.05)；SP-cAMP浓度为5、50 μmol/L时,上述3种因子高于0μmol/L(P＜0.05)；50 μmol/L时明显高于5 μmol/L(P ＜0.05).SP-cAMP作用的最适宜浓度为50 μmol/L.(5)不同浓度H-89作用羊膜上皮细胞2h,细胞中cAMP水平和总CREB表达水平比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).PKA活性、p-CREB和AQP3表达水平比较,差异均有统计学意义(P ＜0.05)；H-89浓度为10、50和100μmol/L时,上述3种因子均低于0 μmol/L(P＜0.05),10 μmol/L时明显低于50和100 μmol/L(P＜0.05).H-89作用的最适宜浓度为10 μmol/L.(6)5 μmol/L forskolin联合10 μmol/L H-89作用2h后,羊膜上皮细胞中总CREB表达水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).p-CREB与AQP3表达水平比较,低于5 μmol/L forskolin作用2 h(P ＜0.05),但高于10 μmol/L H-89作用2 h(P ＜0.05).结论 cAMP-PKA信号传导通路对羊膜上皮细胞中AQP3蛋白的表达起调控作用。