【摘 要】
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目的 探讨核因子-κB(NF-κB)亚基P65磷酸化是否参与化学性缺氧模拟剂氯化钴(CoCl2)诱导的永生化人皮肤角质形成细胞(HaCaT)毒性作用及炎症反应.方法 用2 mmol/L CoCl2处理Ha
【机 构】
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中山大学中山医学院生理教研室,中山大学附属第一医院皮肤科,中山大学孙逸仙纪念医院皮肤科,第三军医大学附属西南医院全军肝胆外科研究所,中山大学附属黄埔院区麻醉科
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目的 探讨核因子-κB(NF-κB)亚基P65磷酸化是否参与化学性缺氧模拟剂氯化钴(CoCl2)诱导的永生化人皮肤角质形成细胞(HaCaT)毒性作用及炎症反应.方法 用2 mmol/L CoCl2处理HaCaT细胞,建立化学性缺氧诱导HaCaT细胞损伤的体外模型.RNA干扰法下调NF-κB亚基P65的表达.细胞计数试剂盒-8比色法检测细胞存活率;ELISA法检测培养基中IL-6和IL-8的含量;Western印迹法检测总量P65及磷酸化P65的蛋白表达.结果 CoCl2处理HaCaT细胞0～4 h,可促进NF-κB亚基P65的磷酸化,在0.5 h时P65亚基开始磷酸化,1.5 h时P65亚基的磷酸化水平达到高峰,约为对照组的6.6倍,而4 h基本恢复到正常水平.CoCl2处理HaCaT细胞0～6 h,可时间依赖性地降低细胞活力,2、4和6 h的细胞存活率与对照组比较,P值分别＜0.05、＜0.01及＜0.01.CoCl2处理6 h,还引起IL-6和IL-8的释放显著增加.RNA干扰法下调P65的表达后,CoCl2处理引起的HaCaT细胞毒性作用被明显减弱,即使细胞存活率升高了11%左右,下调P65表达还明显抑制了CoCl2处理引起的IL-6和Il-8释放增多.结论 磷酸化NF-κB亚基P65介导CoCl2诱导的HaCaT细胞毒性及炎症反应.
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