论文部分内容阅读
目的:探索二氢卟吩e6介导的光动力疗法联合重组人血管内皮抑制素(恩度)对肝癌作用及机制,为临床应用恩度联合光动力治疗肝癌提供依据。本实验分成两部分来探讨,(1)恩度使肿瘤微血管正常化时间窗的观察;(2)研究在肿瘤微血管正常化时间窗内联合光动力对人肝癌荷瘤鼠的作用及机制。方法:(1)传统方法建立肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠移植瘤模型。随机将48只形成皮下移植瘤的裸鼠分为2组,每组24只,分为恩度组(Endostar 20 mg/kg/d,d1-6)和生理盐水对照组(NS 0.2 ml/d,d1-6),分别于治疗第3、4、5和6天各处死6只,取瘤。行免疫组织化学染色。观察经恩度治疗后荷瘤裸鼠肿瘤组织微血管密度、结构及组织乏氧状况的动态变化。(2)传统方法建立裸鼠移植瘤模型后随机将48只成瘤裸鼠分为8组,每组6只:恩度+生理盐水组(Endostar 20 mg/kg/d,d1-4+NS 0.2 ml/d,d5)、恩度+Ce6组(Endostar 20 mg/kg/d,d1-4+Ce6 10 mg/kg/d,d5)、恩度+生理盐水+激光组(Endostar 20 mg/kg/d,d1-4+NS 0.2 ml/d,d5+L,d5)、恩度+Ce6+激光组(Endostar 20 mg/kg/d,d1-4+Ce6 10 mg/kg/d,d5+L,d5)、单纯生理盐水组(NS 0.2ml/d,d1-5)、生理盐水+Ce6组(NS 0.2 ml/d,d1-4+Ce6 10mg/kg/d,d5)、生理盐水+激光组(NS 0.2 ml/d,d1-4+L,d5)、生理盐水+Ce6+激光组(NS 0.2 ml/d,d1-4+Ce6 10mg/kg/d,d5+L,d5)。隔天测量裸鼠体重及肿瘤长径和短径并作好记录。2周后取瘤及裸鼠内脏。计算抑瘤率,绘制肿瘤生长曲线,肿瘤及裸鼠内脏行HE染色观察肿瘤的坏死及转移。结果:(1)肿瘤微血管密度:恩度组棕黄色区较对照组连续,但CD31总量表达减少,d4与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);(2)周细胞成熟度:恩度组在4～6 d时,NG2及a-SMA表达升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);(3)基底膜成熟度:恩度组IV型胶原在d4表达升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);(4)乏氧指标:肿瘤组织中HIF-1α的表达恩度组在给药后d4-6降低,与NS组比较差异有统计学意义(P<0.05),同样,哌莫硝唑低氧探针乏氧区域表达在4 d表达降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);(5)体积变化及抑瘤率:Endostar+PDT组肿瘤生长较慢,抑瘤率较高,与其他各组比较差异有统计学意义(P<0.05);(6)肿瘤组织坏死情况。Endostar+PDT组坏死明显,NS组坏死较少;(7)内脏转移情况:除Endostar+PDT组外,其它组均可见肿瘤肝转移,以NS组明显,肿瘤在肝脏呈浸润性生长,其余内脏器官未见明显瘤细胞。结论:恩度治疗第4～6天可以使肿瘤微血管产生一个短暂的趋于正常化状态的时间窗,肿瘤乏氧状态得到改善。在此时间窗内联合光动力治疗肝癌可明显抑制肿瘤的生长和转移。